论文摘要
目的研究人胚肺成纤维（human embryonic lung fibroblastic，HEL）细胞细胞周期相关因子Cdt1与Geminin的表达状态及人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）感染对两者表达的影响，探讨HCMV感染可能的发病机制。方法用血清饥饿法同步化HEL细胞于G0／G1期，流式细胞术检测细胞周期；用HCMV感染同步化的HEL细胞作为感染组，同时设模拟感染组为对照组。用倒置相差显微镜观察两组细胞形态学变化至感染后168小时。于感染后12h（hour）、24h、48h、72h和96h收获细胞，提取总的RNA，采用半定量逆转录—聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测Cdt1-mRNA和Geminin-mRNA的表达水平。结果1、模拟感染组未见细胞形态学改变，感染组感染后36h即可见局部细胞变圆、膨胀，胞体及胞核巨大化，168h时可见所有细胞均发生病变。2、分别用含O．5％，1％，2％和10％新生牛血清的DMEM培养基培养HEL细胞，48小时后收获细胞，结果显示处于G0／G1期的HEL细胞所占百分数分别为82.8％，78.4％，69.9％，43.8％。新生牛血清浓度为0.5％时，细胞同步化较理想，所同步化的HEL细胞可用于试验。3、12h、24h、48h和72h两组HEL细胞Cdt1-mRNA表达水平均有显著性差异（P＜0.05），12h和24h感染组较模拟感染组明显降低，48h和72h时感染组较模拟感染组明显升高。将其制成时间与Cdt1-mRNA表达水平线图显示，模拟感染组在感染后12h时Cdt1-mRNA表达水平最高，感染组在感染后48h达最高峰。4、12h、24h、48h和72h两组HEL细胞Geminin-mRNA表达水平均有显著性差异（P＜0.05），12h和24h感染组较模拟感染组明显增加，48h和72h时模拟感染组较感染组明显升高。将其制成时间与Geminin-mRNA表达水平线图显示，感染组在感染后12h时Geminin-mRNA表达水平最高，模拟感染组在感染后48h达最高峰。结论：1、血清饥饿法将绝大部分HEL细胞同步于G0／G1期，0.5％新生牛血清的DMEM培养基饥饿HEL细胞同步化效果较佳。2、HCMV能诱导Cdt1及Geminin因子表达异常，使Geminin／Cdt1平衡失调，这可能是HCMV感染导致细胞周期阻滞于G1期的机制。