去甲基斑蝥素脂质微球注射液的研究

论文题目: 去甲基斑蝥素脂质微球注射液的研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 药剂学

作者: 邵瑞莹

导师: 唐星

关键词: 去甲基斑蝥素,脂质微球,脂肪乳剂,药代动力学,生物利用度,安全性

文献来源: 沈阳药科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 脂质微球作为脂溶性药物的靶向给药载体已得到了广泛的关注，特别是作为抗癌药物、麻醉药物及抗炎药物载体。由于药物包裹于油相或乳化剂层中，可以避免与血管内壁直接接触，从而降低药物在注射部位所产生的刺激性及由此而引发的全身毒性，更显示其优势。去甲基斑蝥素（Norcantharidin，NCTD）为由我国首先合成的抗肿瘤药物，临床上主要应用于肝癌的治疗，具有药理活性明确、药效良好等特点。由于NCTD在水中溶解度较小，在临床上主要以其钠盐的注射液应用，但pH较高（约9.0），使用时因高pH值和NCTD本身的强大腐蚀性而产生较大的刺激性，限制了临床上的应用。本实验将NCTD制备成注射用脂质微球（Lipid microsphere，LM），将油相及由乳化剂组成的油水界面膜作为主要目标载药部位，通过各种处方及工艺因素的筛选，将药物的包裹率提高至80％以上，以充分发挥脂质微球的剂型优势，降低NCTD临床使用的刺激性、增效减毒。同时，本实验以NCTD注射液作为参比制剂，对NCTD脂质微球的大鼠体内药代动力学特征进行了考察，并进行了本制剂体外及动物体内安全性实验。建立了NCTD的HPLC—离子交换色谱分析方法，采用阴离子交换色谱柱分离样品，灵敏度较高，空白辅料、表面活性剂等辅料无干扰，适用于NCTD脂质微球的质量控制；其次对NCTD的溶解性能进行了考察，NCTD在pH1.0、pH5.6、pH8.0、pH10.0及蒸馏水中的溶解度分别为3.15、5.59、8.90、29.33、6.72mg·mL-1，且表观油／水分配系数随水相pH值降低而增加。由于NCTD在油中及水中的溶解度均较低，且相对亲水性稍强，因此在处方因素及制备工艺的研究中，在确保NCTD脂质微球稳定性的基本前提下，将提高脂质微球载药量及提高药物在油相／乳化剂层的包裹率作为筛选处方及制备工艺的主要评价指标。在此过程中，优化出了NCTD加入方法、高压均质温度、压力及次数，卵磷脂的不同加入方法对脂质微球粒径及稳定性的影响，优化了乳化剂中卵磷脂与F68的比例、油酸钠的用量，并考察了pH值对脂质微球的影响。结果表明，乳化剂用量及卵磷脂与F68的比例等是影响脂质微球稳定性的主要因素，单独使用卵磷脂作为乳化剂的处方经高压灭菌后液面出现油滴，但卵磷脂用量低于0.6％时，制剂不稳定，以卵磷脂—F68（0.6∶0.6）作为乳化剂，总量为1.2％时脂质微球稳定性较好且粒度分布均匀（约200 nm）；油相中MCT的比例、pH值等是影响药物包裹率的主要因素，增加油相中MCT比例或降低制剂的pH值，均可提高药物在油相、油水界面膜中的分布，当pH值为7.0，MCT—LCT（7.5∶2.5）时，药物总包裹率可达80％以上，而单纯使用MCT作为油相时制剂不稳定。确定了NCTD脂质微球的最终处方及制备工艺为：油相组成为注射用大豆油—MCT（2.5∶7.5），乳化剂总量为1.2％（卵磷脂：F68=1∶1），油酸钠为0.03％；均质前调节pH值至7.0，高压均质的温度为40℃，压力为800 bar，6～10次，灌封氮气，121℃灭菌15 min。以上方法所制得三批脂质微球平均粒径约为195.2 nm，NCTD在油相及乳化剂层的总分布量为84.6％。与稀释剂混合后考察粒径经时变化的结果显示，本品以生理盐水稀释后油滴出现聚结现象，粒径、ζ-电位及药物包裹率经时变化较大；以葡萄糖注射液稀释样品的粒径、ζ-电位值变化较小，以5倍量稀释时制剂在2 h内的包裹率可保持在80％以上。因此建议临床使用葡萄糖注射液为稀释剂，稀释倍数为5，2 h内使用时安全的。稳定试验研究表明本品在25±2℃及6±2℃条件下放置6个月物理化学性质几乎没有改变。建立了HPLC-MS系统测定大鼠血浆中NCTD的测定方法，NCTD脂质微球和普通的注射液的大鼠体内药时过程均符合双隔室模型，非隔室模型分析结果表明，受试制剂药时曲线下面积（AUC）为125.30±18.46μg·mL-1·h，为参比制剂的100.34％，两制剂药时曲线形状相同，各药动学参数无显著性差异。安全性试验表明，NCTD乳剂静脉给药的LD50值为18.6mg／kg，大于NCTD注射液的16.1mg／kg，说明改变剂型后NCTD毒性降低，可能减轻临床应用时的毒副反应。NCTD脂质微球体外不引起溶血，兔耳缘静脉刺激性实验表明本品无血管刺激性。大鼠舐足实验结果显示，大鼠右后足注射NCTD脂质微球及参比制剂注射液后15 min内平均舐足次数存在显著性差异，分别为8.7次及18.2次，表明将NCTD制备成脂质微球后，注射部位局部刺激性较注射液可降低50％以上。

论文目录:

中文摘要

ABSTRACT

前言

第一章处方前研究工作

1 仪器与材料

2 方法与结果

2.1 NCTD的精制

2.2 NCTD测定方法的建立

2.2.1 紫外吸收特征

2.2.2 色谱条件

2.2.3 溶液的配制

2.2.4 方法专属性试验

2.2.5 线性关系考察

2.2.6 稳定性、重复性及回收率考察

2.3 NCTD溶解性能的测定

2.4 NCTD表观油水分配系数的测定

3 讨论

4 小结

第二章处方工艺研究

1 仪器与材料

1.1 仪器

1.2 药品

2.方法

2.1 处方及制备工艺

2.2 高压均质过程

2.3 粒径及ζ-电位的测定

2.4 样品的离心

2.4.1 稳定性参数Ke的测定

2.4.2 药物在LM中分布的研究

3 结果

3.1 制备条件考察

3.1.1 制备温度的考察

3.1.2 去甲基斑蝥素的加入方法

3.1.3 高压均质压力的考察

3.1.4 高压均质次数的考察

3.2 处方因素考察

3.2.1 油相组成的考察

3.2.2 脂质微球载药能力的确定

3.2.3 药物浓度对包裹率的影响

3.2.4 卵磷脂加入方法的考察

3.2.5 卵磷脂与F68比例的考察

3.2.6 油酸钠的作用考察

3.2.7 PH值对脂质微球稳定性的影响

3.2.8 脂质微球灭菌条件的确定

3.3 NCTD脂质微球的处方及制备工艺的确定

4 小结

第三章 NCTD脂质微球理化性质及稳定性考察

1 仪器与药品

2 脂质微球理化性质考察

2.1 粒径及粒度分布考察

2.2 ζ-电位的测定

2.3 NCTD脂质微球含量测定及包裹率考察

2.4 NCTD脂质微球体外释放特性研究

2.5 NCTD脂质微球稀释介质的筛选

3 NCTD脂质微球稳定性考察

3.1 考察项目

3.1.1 外观

3.1.2 pH值

3.1.3 游离脂肪酸

3.1.4 含量

3.1.5 粒度测定

3.2 冷冻—加热循环实验

3.3 加速稳定性考察

3.4 长期稳定性的考察

4 小结

第四章 NCTD脂质微球大鼠体内药代动力学研究

1 仪器、试药及实验动物

2 方法与结果

2.1 质谱条件及色谱发件

2.2 对照品及内标溶液配制

2.3 浆样品处理与测定

2.4 方法专属性考察

2.5 标准曲线与线性范围考察

2.6 回收率及精密度考察

2.7 血浆样品的稳定性

3 NCTD大鼠体内药物动力学研究

3.1 给药方案

3.2 实验结果

3.3 结果处理

3.3.1 隔室模型药物动力学参数

3.3.2 非隔室模型药物动力学参数

4 讨论

5 小结

第五章 NCTD脂质微球安全性研究

1 实验材料

1.1 药品与试剂

1.3 实验仪器

2.安全性实验

2.1 急性毒性实验

2.2 体外溶血实验

2.3 刺激性实验

2.3.1 家兔耳缘静脉血管刺激性考察

2.3.2 大鼠舐足实验

3.小结

全文结论

参考文献

致谢

发布时间: 2006-12-14

参考文献

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