应用组织芯片检测宫颈癌中Survivin mRNA及其蛋白与P63蛋白的表达和临床意义

论文摘要

目的:宫颈癌（cervical carcinoma）是女性生殖道恶性肿瘤中最常见者之一,其发生过程要经历一个较长的癌前病变,即宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）过程。目前已知肿瘤的发生不仅与肿瘤细胞的增殖和分化异常有关,而且与细胞凋亡基因的变化有关。增殖和凋亡之间的失衡可导致肿瘤的发生。本实验通过对正常宫颈、CIN及宫颈鳞状细胞癌组织中存活素（Survivin）、P63蛋白表达的检测,探讨Survivin、P63的表达在宫颈癌发生、发展过程中的作用;Survivin、P63的表达与宫颈癌浸润和转移的关系;观察P63在宫颈不同病变中表达分布的差异,阐述其在宫颈上皮分化过程中的作用;Survivin与P63的表达在宫颈癌组织中的相关性,为进一步揭示宫颈癌的发病机制提供理论依据。方法:1应用免疫组织化学法（Immunohistochemistry,IHC）检测54例宫颈癌组织、153例CIN组织及39例正常宫颈组织中Survivin蛋白、P63蛋白的表达。2应用原位杂交技术（In Situ Hybridization,ISH）检测54例宫颈癌组织、153例CIN组织及39例正常宫颈组织中Survivin mRNA的表达。3应用自制组织芯片技术将247例供体标本,按阵列设计顺序依次放入受体蜡块中,融合、切片、捞片、烤片制成需要的组织芯片。结果:1组织芯片制备结果按课题需要制作6×5组织芯片6张,5×7组织芯片2张,组织点阵排列整齐,无点阵移位现象,无意义位点51个。故标本实际例数为宫颈癌48例,正常宫颈35例,CIN113例。组织位点的形态可观测率为89.36%。HE染色均匀,无脱片、异位和皱折。原位杂交染色及免疫组化染色,阳性定位清楚,背景干净。2 Survivin在宫颈不同病变中的表达采用ISH和IHC法分别检测Survivin mRNA和蛋白在48例宫颈癌组织、35例正常宫颈组织及113例CIN组织中的表达,检测结果显示:无论是蛋白水平还是mRNA水平,癌组织中Survivin的表达（ISH:64.58%,IHC:87.50%）均高于正常宫颈组织（ISH:14.29%,IHC:31.43%）（P<0.05）;Survivin蛋白在宫颈癌组织中的表达与CINⅠ（70.37%）、CINⅡ（77.14%）、CINⅢ（80.39%）中的表达无明显差异（P>0.05）。Survivin mRNA在宫颈癌组织中的表达与在CINⅡ（48.57%）、CINⅢ（60.78%）中的表达无明显差异（P>0.05）,但与CINⅠ（29.63%）中的表达差异显著（P<0.05）。综合IHC和ISH的结果,Survivin与患者年龄、分化程度、淋巴结转移、肿物直径及临床分期无关（P>0.05）。宫颈癌组织中Survivin蛋白的表达与Survivin mRNA的表达呈正相关（rs=0.529,P<0.05）。3 P63蛋白在宫颈不同病变中的表达采用IHC法检测48例宫颈癌组织、35例正常宫颈组织及113例CIN组织中P63蛋白的表达发现,P63在宫颈癌组织中的强阳性率为25.00%,明显高于正常宫颈组织、CINⅠ及CINⅡ中的强阳性率,三者强阳性率分别为0%,3.70%,8.57%（P<0.05）;但与CINⅢ的强阳性率（17.65%）无明显差异（P>0.05）;从CINⅠ→Ⅱ→Ⅲ,P63的表达具有显著性差异（P<0.05）。P63的表达与患者年龄、肿物直径、临床分期及淋巴结转移无关（P>0.05）,与肿瘤分化程度相关（P<0.05）。4 P63蛋白与Survivin蛋白的关系在宫颈癌组织中P63蛋白的表达与Survivin蛋白的表达呈显著正相关（rs=0.364,P<0.05）。5 P63蛋白与Survivin mRNA的关系在宫颈癌组织中P63蛋白的表达与Survivin mRNA的表达无明显相关性（rs=-0.016,P>0.05）。结论:1 Survivin mRNA和蛋白在宫颈癌组织中的表达明显高于正常宫颈组织,因而提示Survivin可能与宫颈癌的发生有关。Survivin mRNA在宫颈癌与CINⅠ的表达差异显著,提示Survivin mRNA对宫颈早期病变的检测是有用的。Survivin mRNA及蛋白的表达与年龄、肿物分化程度、淋巴结转移、肿物直径及临床分期无相关性。2 Survivin蛋白在正常宫颈与CIN各级病变中的表达差异具有显著性,说明Survivin可以作为宫颈癌前病变检测指标;Survivin蛋白在宫颈癌与CIN各级病变之间的差异不显著,说明Survivin蛋白可能参与宫颈的不同病变过程。Survivin蛋白在CIN不同病变中的表达无差异,但却存在明显的分层变化,其分布规律与CIN的变化一致,这提示Survivin能为CIN病变提供一个较直观的依据。3宫颈癌组织中Survivin蛋白的表达与Survivin mRNA的表达关系密切,揭示Survivin蛋白的表达水平可以间接反映其mRNA的表达水平,而且Survivin的高表达可能与Survivin基因转录水平的上调有关。4 P63蛋白在宫颈癌组织中的表达明显高于正常宫颈组织,因而提示P63可能与宫颈癌的发生有关;从CINⅠ→Ⅱ→Ⅲ,P63的表达具有显著性差异,说明P63与鳞状上皮的分化程度呈反比,也提示P63对CIN的分期是有用的; P63在不同肿瘤分化的宫颈癌组织中的表达具有明显差异,提示P63与宫颈上皮分化的程度密切相关;P63蛋白的表达与年龄、淋巴结转移、肿物直径及临床分期无相关性。5宫颈癌组织中Survivin蛋白的表达与P63蛋白的表达关系密切,且随着Survivin蛋白表达强度的增强,P63也随之增强,提示两者在宫颈癌的发生、发展过程中可能具有协同作用。但P63与Survivin mRNA的表达无相关性,说明P63与Survivin之间的协同作用是发生在蛋白水平上的。6组织芯片手工制做,程序简单、经济方便,是一种简便可行,高效稳定的技术方法,能满足相关科研课题和实际工作的需要。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 应用组织芯片检测宫颈癌中Survivin mRNA 及其蛋白与P63 蛋白的表达和临床意义
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 Survivin 与子宫颈癌的研究及进展
• 致谢
• 个人简历