论文摘要
目的:体外观察不同浓度富血小板血浆(PRP)对自体骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性和mRNA表达的影响。对PRP诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化的生物学效应进行初步评价。 方法:抽取狗静脉血,采用改进Appel方法制备PPP和不同血小板浓度的PRP。取狗骨髓,于含15%胎牛血清的D-MEM-F12培养液中培养,经传代培养筛选,获得足够数量稳定的骨髓基质细胞(BMSCs)。实验分5组,分别加入诱导物(A组PPP+BMSCs,B组PRP+BMSCs,C组4倍PRP+BMSCs,D组rhBMP+BMSCs,E组为空白对照组),分别在第3、6、9、12天用酶动力学法检测碱性磷酸酶活性,用RT-PCR法在第6天检测碱性磷酸酶mRNA的表达,Von kossa染色鉴定成骨细胞。 结果:(1)原代培养的骨髓基质细胞24h开始贴壁,12d后细胞融汇成单层,细胞多呈成纤维梭形细胞形态,经诱导液传代培养后,细胞形态渐变为方形、多角形。(2)酶动力学法测定各实验组细胞第3、6、9、12天检测碱性磷酸酶活性,经过配对t检验,各组第6、9、12天的ALP活性水平均较第3天明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)用RT-PCR法检测第6天碱性磷酸酶mRNA的表达,结果显示PRP低浓度组ALPmRNA表达明显高于对照组。(4)Von kossa染色鉴定成骨细胞:细胞密集区出现大面积黑染区域,即钙结节。 结论:一定浓度的PRP能诱导骨髓基质细胞碱性磷酸酶mRNA的表达增加,并提高细胞碱性磷酸酶的活性,PRP能有效的促使BMSCs向前期成骨细胞分化。骨组织学观察证实PRP能诱导BMSCs向成骨细胞分化。
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