核基质蛋白在人成骨肉瘤MG-63细胞诱导分化中的变化研究

论文摘要

本论文在鉴定HMBA诱导人成骨肉瘤MG-63细胞终末分化的结果基础上,应用亚细胞蛋白质组学分析技术,对核基质蛋白在MG-63细胞诱导分化过程中的变化进行系统研究。分析鉴定与肿瘤细胞增殖分化相关的特异核基质蛋白,并探索它们在肿瘤细胞诱导分化过程中的调控作用,以期能够在较为整体水平上进一步认识细胞癌变与逆转机理问题,从而找出细胞增殖与分化调控研究的新方向。实验结果显示,5mmol/L HMBA有效抑制了人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖活动,改变细胞形态和超微结构恶性表型特征,并促使MG-63细胞表达骨钙素、骨粘素等成骨特异标志蛋白,光镜和选择性抽提整装电镜观察显示经HMBA处理的MG-63细胞产生了核基质-中间纤维系统构型的恢复性变化。双向凝胶电泳分析显示在HMBA诱导MG-63细胞分化前后存在16个差异表达核基质蛋白,MALDI-TOF质谱鉴定显示其核基质蛋白的成分产生了MHCⅡ类抗原、ISGF3α、8-羟基鸟嘌呤糖基化酶同功酶ogg1、vimentin、与60S核糖体蛋白L21相似的蛋白上调,hnRNP A2 / B1、actin和prohibitin蛋白下调,新出现DKFZp434M2221.1蛋白、ST2蛋白的差异变化。蛋白印迹杂交与免疫荧光显微镜观察确证了vimentin、actin、hnRNP A2/B1和prohibitin在MG-63细胞分化过程中的表达变化。由HMBA处理的人胃腺癌MGc80-3细胞和RA处理的MG-63细胞的平行对照分析显示vimentin、actin、hnRNP A2/B1和prohibitin是诱导处理前后共同差异核基质蛋白。免疫荧光激光共聚焦显微镜观察结果进一步显示vimentin和actin、hnRNP A2/B1和actin、prohibitin和actin以及prohibitin与癌基因c-myc、c-fos和抑癌基因p53、Rb表达产物有共定位关系。研究结果表明,5 mmol/L HMBA对人成骨肉瘤MG-63细胞的终末分化具有显著诱导作用,在MG-63细胞分化过程中不仅其核基质-中间纤维系统构型产生了与其相应正常细胞相似的恢复性变化,并且其核基质蛋白组成也相应产生明显变化,出现了MHCⅡ抗原、IFN刺激的基因因子3α91/84 kda蛋白、DKFZp434M2221.1蛋白、8-羟基鸟嘌呤糖基化酶同功酶ogg1、vimentin、与60S核糖体蛋白L21相似的蛋白质和白介素I受体ST2蛋白等核基质蛋白表达的差异。其中vimentin、actin、hnRNP A2/B1和prohibitin为不同诱导分化物诱导同一肿瘤细胞和同一诱导分化物

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 一 前言
• 1.1 肿瘤细胞诱导分化研究的理论和实践意义
• 1.2 细胞核基质结构与功能及其在细胞增殖与分化中的重要调控地位
• 1.3 系统生物学、蛋白质组与亚细胞蛋白质组学，及其在细胞生物学研究中的应用
• 1.4 人成骨肉瘤细胞的生物学特性和肿瘤细胞终末分化诱导研究
• 1.5 本研究拟解决的问题和探索途径
• 二 材料与方法
• 2.1 试剂与耗材
• 2.2 仪器
• 2.3 常用试剂的配制
• 2.4 实验方法与操作步骤
• 三 实验结果
• 3.1 HMBA 对人成骨肉瘤MG-63 细胞增殖的抑制
• 3.2 HMBA 对人成骨肉瘤MG-63 细胞形态的影响
• 3.3 HMBA 对人成骨肉瘤MG-63 细胞骨特异性分化指标的影响
• 3.4 HMBA 对人成骨肉瘤MG-63 细胞核基质-中间纤维系统构型变化观察
• 3.5 HMBA 诱导人成骨肉瘤MG-63 细胞分化过程中核基质蛋白表达的变化
• 3.6 HMBA 诱导人低分化胃腺癌MGc80-3 细胞分化过程中核基质蛋白的变化
• 3.7 差异表达核基质蛋白的确证及其在人成骨肉瘤MG-63 细胞核基质－中间纤维系统的定位
• 3.8 差异表达蛋白质在人成骨肉瘤MG-63 细胞中的共定位关系
• 四 讨论
• 4.1 HMBA 对人成骨肉瘤MG-63 细胞终末分化的诱导作用
• 4.2 人成骨肉瘤MG-63 细胞增殖分化过程中核基质－中间纤维系统构型变化特征
• 4.3 人成骨肉瘤MG-63 细胞增殖分化相关的特异性核基质蛋白以及其在不同肿瘤细胞和不同诱导药物处理后的表达差异
• 4.4 特异性核基质蛋白在人成骨肉瘤MG-63 细胞增殖分化中的作用
• 4.5 特异性核基质蛋白Prohibitin 在人成骨肉瘤MG-63 细胞增殖分化中的作用
• 4.6 HMBA 诱导人成骨肉瘤MG-63 细胞终末分化的作用机制
• 五 总结
• 六 参考文献
• 在校期间发表的论文
• 致谢