南美白对虾主要过敏原鉴定及酶法消减技术的研究

论文摘要

以南美白对虾、中国明对虾、刀额新对虾以及虾蛄四种海虾为研究对象,对四种海虾过敏原蛋白组分进行研究。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对四种海虾过敏原组分进行分析,经免疫印迹鉴定其主要过敏原。南美白对虾的主要过敏原为99kDa、33kDa、19kDa以及14kDa的蛋白质组分;中国明对虾的主要为39kDa、33kDa和28kDa的蛋白质组分;刀额新对虾的主要为33kDa和24kDa的蛋白质组分;虾蛄的为56kDa和48kDa的蛋白组分。用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对南美白对虾蛋白水解,消减过敏原,通过间接酶联免疫吸附实验进行检测,以OD492nm值为指标确定三种蛋白酶的最佳水解条件。胰蛋白酶最佳水解条件为:pH8.0,酶底比1:100,45℃,底物浓度3%,水解时间3h;木瓜蛋白酶的为pH6.5,酶底比1:100,60℃,底物浓度3%,水解时间3h;菠萝蛋白酶的为:pH7.5,酶底比1:100,55℃,底物浓度5%,水解时间3h。以卵白蛋白为阳性对照,PBS溶液为阴性对照,建立豚鼠全身过敏反应和离体肠管平滑肌收缩反应过敏试验动物模型。结果显示,用0.01~2g/100mL卵白蛋白致敏并激发后,100%豚鼠全身过敏反应呈阳性。相似质量浓度的南美白对虾蛋白(0.01~2g/100mL)的全身过敏反应与阳性对照组相近,离体肠管平滑肌过敏性收缩反应的实验结果与全身过敏反应结果相似。对南美白对虾的三种蛋白酶(胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶)水解产物的致敏性进行评价,结果显示,三种南美白对虾的蛋白酶水解产物所致的全身过敏反应均明显减弱同时三种南美白对虾的蛋白酶水解产物致敏的离体肠管平滑肌对南美白对虾蛋白和三种水解产物攻击的反应也明显减弱。用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶水解虾肉,通过间接酶联免疫吸附实验进行检测,以OD492nm值为指标确定最佳水解条件。结果表明,胰蛋白酶最佳水解条件为:pH值为8.0,酶与底物比1:100,水解温度为45℃,底物浓度为5%,水解时间为3h,水解物OD值为0.085;木瓜蛋白酶最佳水解条件为pH值为6.5,酶与底物比1:100,水解温度为60℃,底物浓度为5%,水解时间为3h,水解物OD值为0.049。研究发现用木瓜蛋白酶水解虾肉,其过敏原的消减效果最好。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 课题的研究背景
• 1.2 国内外研究概况及进展
• 1.3 过敏反应的分类及其反应机理
• 1.4 过敏原诊断及检测方法
• 1.5 海虾过敏原的降低方法
• 1.6 开展此课题的意义
• 第二章 材料和方法
• 2.1 免疫印记法检测四种海虾主要过敏原蛋白组分
• 2.2 蛋白酶水解南美白对虾水溶性蛋白组分
• 2.3 建立南美白对虾过敏实验动物模型
• 2.4 水解产物的致敏性评价
• 2.5 对南美白对虾虾肉水解及致敏性评价
• 第三章 实验结果
• 3.1 四种海虾主要过敏原蛋白组分的鉴定
• 3.2 蛋白酶水解消减南美白对虾蛋白过敏原蛋白
• 3.3 南美白对虾过敏实验动物模型的建立
• 3.4 水解产物的致敏性评价结果
• 3.5 酶解南美白对虾虾肉对过敏原蛋白的消减效果
• 第四章 分析与讨论
• 4.1 四种海虾主要过敏原的分析
• 4.2 不同蛋白酶对南美白对虾主要过敏原水解的效果
• 4.3 过敏实验动物模型的分析
• 4.4 不同蛋白酶水解产物致敏性分析
• 4.5 最佳水解条件对南美白对虾虾肉水解的效果及致敏性评
• 第五章 结论
• 参考文献
• 论文、参加科研情况说明以及学位论文使用授权声明
• 致谢