水稻淀粉合成相关基因分子标记的建立及其遗传网络初步探析

水稻淀粉合成相关基因分子标记的建立及其遗传网络初步探析

论文摘要

稻米淀粉由直链淀粉和支链淀粉组成,两类淀粉的比例及支链淀粉的结构共同决定了稻米淀粉的品质。直链淀粉(Amylose)是由蜡质基因(Wx)编码的颗粒结合性淀粉合成酶(GBSSI)负责合成。支链淀粉(Amylopectin)由可溶性淀粉合成酶(SSS)、淀粉分支酶(SBE)、和淀粉脱分支酶(DBE)等协同合成,同时各类酶又存在数目不等的同工型(Isoform)。因而,支链淀粉的合成相当复杂。目前,关于Wx基因的遗传调控机理及其对品质的影响已研究的较为深入,而关于支链淀粉合成相关基因的研究还不是很多。本研究在对13个品质性状上具有代表性的品种中的18个淀粉合成相关基因进行测序的基础上,在各基因全序列范围的InDel及SNP特异位点处有选择性地进行标记设计,主要是基于PCR扩增检测的STS标记和CAPs标记,每个基因座上建立2-4个分子标记。先利用13个测序品种进行分子标记的验证。经验证多态性高、条带清晰、重复性好的分子标记,用来检测64份不同生态类型品种的基因型,初步研究了这些标记在复等位基因研究方面的应用潜力。同时对该群体(其中60份品种)进行稻米理化品质性状(直链淀粉含量AC、胶稠度GC、淀粉粘滞性谱特征RVA profile、糊化温度GT)的调查分析;结合分子标记检测结果,建立线性模型并采用贝叶斯算法初步分析了稻米淀粉合成的遗传网络。本研究主要结果如下:1.本研究基于基因组测序技术和现代生物信息学方法,在18个稻米淀粉合成相关基因(AGPsma, AGPiso, AGPlar, Wx, GBSSII, SSI, SSII1, SSII2, SSII3, SSIII1, SSIII2, SSIV1, SSIV2, Sbe1, Sbe3, Sbe4, Pul, Isa)上共建立49份分子标记,对同一基因座位内几个基因位点进行单倍型分析,在该64份生态类型丰富的品种中于10个基因座位内(AGPiso, AGPlar, Wx, SSI, SSII2, SSII3, SSIII1, Sbe1, Sbe4, Pul)检测到了新的单倍型,Pul基因上检测到的新的单倍型最多,这些检测到的新的单倍型主要存在于来源于印度的Aman、Bulu、Dular以及美国的Lemont、Cpslo17等品种。此外,就单个基因位点的等位性变异而言,除了13个测序品种中检测到的基因型外,主要是在野生稻中检测到了新的等位基因型(主要是标记AGPsma-1, SSII1-t1, SSII1-t2, Sbe1-3, Isa-t2, Pul-3)。2.在对60份水稻品种的基因型数据(49份)与品质数据(10个)进行统计分析,建立线性模型,采用贝叶斯算法对各等位性变异在10个品质性状上引起的遗传效应进行估计。包括对各等位变异的主效应分析及各基因位点间在品质性状上的互作遗传效应的分析。检测到12个标记(AGPsma-1、Wx-t1、Wx-2、Wx-3、SSII1-2、SSII2-2、SSII3-2、SSII3-3、SSIII1-1、Pul-1、Pul-2、Isa-t2)对品质表型性状的遗传效应估计值比较大。检测到22个标记(AGPsma-1、Wx-2、Wx-3、GBSSII-1、SSI-1、SSI-2、SSII1-t1、SSII2-2’、SSII3-1、SSII3-2、SSIII1-1、SSIII1-t2、SSIV1-2’、SSIV2-1、SSIV2-t1、Sbe1-1、Sbe1-t3、Sbe3-t1、Sbe4-1、Pul-3、Isa-t1、Isa-t2)在淀粉品质形成过程中存在遗传互作效应,这些互作作用既包括在编码不同类酶的基因之间,又存在于编码同类酶的不同基因之间。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 符号说明
  • 第一章:水稻淀粉合成相关基因分子标记的建立及其在复等位基因研究中的应用
  • 前言
  • 1 材料与方法
  • 1.1 淀粉合成相关基因的确定
  • 1.2 实验材料
  • 1.3 基于PCR 的分子标记设计
  • 1.4 总DNA 的提取
  • 1.5 分子标记检测
  • 1.5.1 PCR 反应体系
  • 1.5.2 PCR 反应条件的优化
  • 1.5.3 PCR 产物检测
  • 2 结果与分析
  • 2.1 分子标记的设计与验证
  • 2.2 分子标记在复等位基因鉴定中的应用
  • 2.3 与籼粳分化有关的标记
  • 3 讨论
  • 4 参考文献
  • 第二章:稻米淀粉合成的遗传网络分析
  • 前言
  • 1 材料与方法
  • 1.1 淀粉合成相关基因
  • 1.2 供试水稻材料
  • 1.3 田间种植
  • 1.4 分子检测
  • 1.4.1 DNA 提取
  • 1.4.2 PCR 扩增及电泳检测
  • 1.5 品质测定
  • 1.5.1 直链淀粉含量(AAC)的测定
  • 1.5.2 淀粉胶稠度(GC)的测定
  • 1.5.3 淀粉粘滞性RVA 谱的测定
  • 1.6 统计分析方法
  • 2 结果与分析
  • 2.1 单个基因位点的遗传效应分析
  • 2.1.1 主效应分析
  • 2.1.2 AGPsma 基因座位内等位变异的遗传效应
  • 2.1.3 Wx 基因座位内等位变异的遗传效应
  • 2.1.4 SSII1 基因座位内等位变异的遗传效应
  • 2.1.5 SSII2 基因座位内等位变异的遗传效应
  • 2.1.6 SSII3 基因座位内等位变异的遗传效应
  • 2.1.7 SSIII1 基因座位内等位变异的遗传效应
  • 2.1.8 Pul 基因座位内等位变异的遗传效应
  • 2.1.9 Isa 基因座位内等位变异的遗传效应
  • 2.2 多个基因位点的遗传网络分析
  • 2.2.1 对品质性状AC 存在互作效应的标记
  • 2.2.2 对品质性状BDV 存在互作效应的标记
  • 2.2.3 对品质性状CSV 存在互作效应的标记
  • 2.2.4 对品质性状HPV 存在互作效应的标记
  • 2.2.5 对品质性状PKV 存在互作效应的标记
  • 2.2.6 对品质性状PeakTime 存在互作效应的标记
  • 2.2.7 对品质性状Pasting Temperature 存在互作效应的标记
  • 2.2.8 品质性状GC 存在互作效应的标记
  • 2.2.9 各基因座位内对品质性状存在互作效应的标记情况
  • 3 讨论
  • 3.1 淀粉合成各相关基因单个基因位点变异对品质性状的遗传效应
  • 3.1.1 Wx 基因上各等位变异对品质性状的遗传效应
  • 3.1.2 可溶性淀粉合成酶基因上各等位变异对品质性状的遗传效应
  • 3.1.3 AGPsma 基因上各等位变异对品质性状的遗传效应
  • 3.1.4 去分支酶基因上各等位变异对品质性状的遗传效应
  • 3.2 淀粉合成途径中各基因之间对品质性状的互作遗传效应分析
  • 3.3 淀粉合成途径中各相关基因内优异等位基因的的应用、探索及展望
  • 4 参考文献
  • 附录
  • 致谢
  • 相关论文文献

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