四逆散改善睡眠作用的机制研究

论文摘要

以往大量临床和实验均表明，中药复方四逆散具有明显的改善睡眠作用，但其改善睡眠作用的机制不明。为了阐明四逆散改善睡眠作用的机制，本实验首先采用戊巴比妥钠协同实验，开展了四逆散冻干粉的量效与时效关系研究；在此基础上，运用戊巴比妥钠协同实验方法，利用脑微透析技术、高效液相电化学检测技术、RT-PCR技术、酶联免疫技术，基于GABA能神经系统、5-HT能神经系统、NO信号通路、SP、IL-1β、TNF-α介导的睡眠理论，开展了四逆散冻干粉改善睡眠作用的多靶点机制研究。研究结果：一、四逆散冻干粉改善睡眠作用的量效与时效关系研究量效关系研究中，在所设的5个剂量中（312．5，625，1250，2500，5000mg／kg，i．g．，7 days），最佳剂量为1250 mg／kg，表现为延长戊巴比妥钠所致小鼠的睡眠时间和缩短其潜伏期，低于或超过此剂量时，与戊巴比妥钠均无协同作用。时效关系研究中（3 day s、5 days、7 day s、9 day s），四逆散冻干粉（1250 mg／kg）起效时间为连续灌胃给予7 day s，连续灌胃9 days与戊巴比妥钠协同作用效果达到最好。二、基于GABA能神经系统介导的四逆散改善睡眠作用的机制研究苯二氮卓类受体阻断剂氟马西尼可以明显阻断地西泮（2．5mg／kg，i．g．）和四逆散冻干粉（1250 mg／kg，9 days，i．g．）对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的增强作用，结果显示，BZD受体介导四逆散冻干粉改善睡眠作用。在此基础上，采用RT-PCR技术，观察了四逆散冻干粉对GABAA受体a1和a5亚单位的mRNA表达的影响。实验结果显示，四逆散冻干粉（1250mg／kg，9 days，i．g．）明显上调小鼠大脑皮质GABAA受体a1亚单位和a5亚单位的mRNA表达，其作用与地西泮（2．5mg／kg，i．g．）相似，但四逆散冻干粉侧重于上调a5亚单位，而地西泮侧重于上调a1亚单位。三、基于NO信号通路介导的四逆散改善睡眠作用的机制研究四逆散冻干粉（1250 mg／kg，9 days，i．g．）能明显升高小鼠全脑内NO含量，提高TNOS活力。阈下剂量的四逆散冻干粉（312．5 mg／kg，9 days，i．g．）合并NO前体物质L-Arg（125mg／kg，i．p．）应用后，能明显延长戊巴比妥钠所致小鼠的睡眠时间，表现一定协同作用。阈剂量的四逆散（1250 mg／kg，9 days，i．g．）合并L-Arg（5 00 mg／kg，i．p．）应用后，则明显缩短戊巴比妥钠所致小鼠的睡眠时间。给予拮抗剂L-NAME（8 0 mg／kg，i．p．），可明显拮抗四逆散的催眠作用。综合以上研究结果，表明四逆散改善睡眠作用是通过适当增加NO含量而发挥作用。四、基于5-HT能神经系统介导的四逆散改善睡眠作用的机制研究阈下剂量的四逆散（312．5 mg／kg，9 days）合并5-HT前体物质5-HTP（25mg／kg，i．p．）应用后，明显延长戊巴比妥钠所致小鼠的睡眠时间，表现一定协同作用。皮下注射PCPA，可以明显缩短戊巴比妥钠所致小鼠的睡眠持续时间，对这种PCPA化小鼠，阈剂量四逆散具有明显拮抗作用，四逆散延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间作用可被PCPA（3 00 mg／kg，s．c．）化阻断。以上研究结果说明四逆散改善睡眠作用主要依赖于5-HT的存在。四逆散合并5-HT1A受体拮抗剂p-MPPI或5-HT2受体拮抗剂Ritanserin给予实验动物小鼠，p-MPPI（0．05 mg／kg，i．p．）可以明显拮抗四逆散（1250mg／kg，9 days，i．g．）对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间延长作用，合并Ritanserin（8 mg／kg，i．p．）与单独给予四逆散冻干粉（1250mg／kg，9 days，i．g．）没有明显差异。以上研究结果说明四逆散延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间与5-HT2受体无关，与5-HT1A受体有关。采用在体脑微透析及同步记录大鼠EEG／EMG技术，观察了四逆散冻干粉（87．5 mg／ml，875 mg／kg，i．g．）对自由活动大鼠觉醒期和NREMS脑中缝核5-HIAA释放量的影响。结果表明灌胃给予四逆散后，能明显降低觉醒期和NREMS自由活动大鼠中缝核内5-HIAA的含量。五、基于SP介导的四逆散改善睡眠作用的机制研究采用酶联免疫法，观察了四逆散对小鼠全脑SP含量的影响。实验结果表明，四逆散冻干粉（1250mg／kg，9 days，i．g．）能明显降低小鼠全脑的SP含量。六、基于细胞因子介导的四逆散改善睡眠作用的机制研究采用酶联免疫法，观察了四逆散对小鼠全脑IL-1β和TNF-α含量的影响。实验结果表明，四逆散冻干粉（1250 mg／kg，9 days，i．g．）能明显降低小鼠全脑的IL-1β和TNF-α含量。小结：综合以上研究结果表明，GABA、5-HT、NO、SP、IL-1β、TNF-α介导参与四逆散改善睡眠作用，四逆散通过以上多靶点作用机制改善睡眠。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 文献综述
• 一、睡眠的生理
• 1 睡眠时相的划分
• 2 睡眠的生理意义
• 3 睡眠与觉醒发生的结构基础
• 二、睡眠的机制
• 1 中枢神经递质调节机制
• 2 NO调节机制
• 3 细胞因子调节机制
• 4 肽类物质调节机制
• 三、四逆散改善睡眠作用的研究进展
• 四、镇静催眠药物的药理学研究方法概况
• 五、化学合成性镇静催眠药物的研究概况
• 六、研究思路
• 七、技术路线
• 实验部分
• 第一部分 四逆散冻干粉改善睡眠作用的量效与时效关系研究
• 1.实验材料
• 2.实验环境
• 3.实验方法
• 4.统计分析
• 5.实验结果
• 第二部分 四逆散冻干粉改善睡眠作用的机制研究
• 一、基于GABA能神经系统介导的四逆散改善睡眠作用的机制研究
• 1.实验材料
• 2.实验环境
• 3.实验方法
• 4.统计分析
• 5.实验结果
• 二、基于NO信号通路介导的四逆散改善睡眠作用的机制研究
• 1.实验材料
• 2.实验环境
• 3.实验方法
• 4.统计分析
• 5.实验结果
• 三、基于5-HT能神经系统介导的四逆散改善睡眠作用的机制研究
• 1.实验材料
• 2.实验环境
• 3.实验方法
• 4.统计分析
• 5.实验结果
• 四、基于肽类物质介导的四逆散改善睡眠作用的机制研究
• 1.实验材料
• 2.实验环境
• 3.实验方法
• 4.实验结果
• 五、基于细胞因子介导的四逆散改善睡眠作用的机‘制研究
• 1.实验材料
• 2.实验环境
• 3.实验方法
• 4.实验结果
• 讨论
• 一、四逆散冻干粉改善睡眠作用的量效与时效关系研究
• 二、四逆散冻干粉改善睡眠作用的机制研究
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读博士学位期间发表的论文
• 个人简历