金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素（PVL）对THP-1巨噬细胞NF-κB信号通路及炎性因子表达的影响

论文摘要

目的： PV-杀白细胞素（Panton-Valentine Leukocidin，PVL）是由金黄色葡萄球菌产生的细胞外毒素，是主要的致病因子。PVL对人和兔的多形核白细胞（PMNs）和巨噬细胞具有高度特异性，本课题目的：1、rPVL对THP-1巨噬细胞的细胞毒性研究；2、探讨rPVL对THP-1巨噬细胞NF-κB信号通路及炎性细胞因子表达的影响。方法：（1）用不同浓度rPVL（1nM/L，5nM/L，10nM/L，20nM/L，40nM/L和80nM/L）作用THP-1巨噬细胞1，3，6h，CCK-8实验检测rPVL对THP-1巨噬细胞活力的影响。（2）5nM/L，20nM/L和40nM/LrPVL作用THP-1巨噬细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡/坏死率。（3）分别用不同浓度的rPVL （5nM/L，20nM/L）刺激THP-1巨噬细胞，于1，3，6h收集细胞培养上清，ELISA法检测细胞培养上清IL-6、IL-8和TNF-α的浓度变化。（4）20nM/LrPVL刺激细胞1，3，6h后，收集细胞，提取总RNA，应用RT-PCR法检测细胞IL-6、IL-8、TNF-α、TLR2、TLR4和CD14mRNA表达。（5）应用免疫细胞化学和Western blotting方法检测rPVL刺激THP-1巨噬细胞NF-κB的蛋白表达。（6）NF-κB阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）阻断NF-κB活化，RT-PCR法和ELISA法检测其对细胞因子表达的影响。结果：（1）随着rPVL对THP-1巨噬细胞作用的浓度和时间的增加，细胞活性进行性下降。（2）rPVL作用THP-1巨噬细胞，流式细胞仪技术定量检测凋亡/坏死，在低浓度（5nM/L rPVL）以凋亡为主，在高浓度（40nM/L rPVL）以坏死为主，且具有时间依赖性。（3）ELISA法检测结果表明，rPVL能诱导THP-1巨噬细胞产生IL-8、IL-6和TNF-α，随着rPVL刺激浓度的增加和时间的延长，IL-8和IL-6表达增加；TNF-α的表达高峰在rPVL刺激1h时，随后逐渐降低。（4）免疫细胞化学方法检测结果显示：正常时，NF-κBp65蛋白在胞浆均匀分布，胞浆内呈棕色均匀淡染，rPVL刺激后2h，NF-κBp65被激活转入核内，染色以核明显。Western blotting方法检测结果表明，rPVL能直接诱导THP-1巨噬细胞迅速活化NF-κB蛋白，具有时间和浓度依赖性。（5）NF-κB阻断剂PDTC能够阻断NF-κB信号通路，抑制IL-6和IL-8蛋白分泌和mRNA的表达。结论：（1）rPVL对THP-1巨噬细胞具有毒性作用，使细胞活力减低，低浓度可诱导细胞凋亡，高浓度可引起坏死（。2）rPVL能诱导THP-1巨噬细胞因子IL-6、IL-8及TNF-α的表达，同时，可上调TLR4表达，活化NF-κB，提示rPVL可通过TLR4/NF-κB信号传导通路，促进细胞因子的表达。（3）PDTC能抑制NF-κB通路，降低IL-6和IL-8等炎性因子的表达。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 2 材料和方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述: 金黄色葡萄球菌Panton-Valentine杀白细胞素的研究进展
• 参考文献