毛喉鞘蕊花枯萎病的病原学及防治技术研究

论文摘要

毛喉鞘蕊花（Coleus forskohlii）是一种药用植物,具有抗肿瘤、降压、强心和消炎等药用功能。湖北福人药业公司从云南昆明植物所引种毛喉鞘蕊花在湖北通城县大力推广种植,随着种植年限的延长,毛喉鞘蕊花枯萎病发生逐年加重,严重田块造成绝收,严重挫伤了药农种植的积极性,导致药用原料的供应短缺,影响了毛喉鞘蕊花的药用开发。目前,未见对该病研究的报道。本研究从该病的病原学入手,在病原鉴定和病菌生物学特性研究的基础上,结合生产实际,根据病害发生特点,探讨了该病的防治技术。研究结果如下:从湖北省通城县新磨苗圃基地的毛喉鞘蕊花发病植株根茎上分离得到镰刀菌（Fusarium sp.）菌株,用该菌株的分生孢子悬浮液和粗毒素滤液接种毛喉鞘蕊花根部,植株均表现叶片萎蔫,根茎部变褐腐烂等症状,证实所分离获得的Fusariumsp.为毛喉鞘蕊花的致病菌。该菌在PDA培养基上培养5d后,菌落呈深紫色,菌丝无色,有隔,分枝。在气生菌丝上产生侧生的简单瓶梗状产孢细胞。大型分生孢子大小为20.1×51.7～1.5×6.0μm,镰刀状轻度弯曲,向两端逐渐狭细,顶细胞渐尖并弯曲成喙状,基细胞足状。多数为3个隔膜,少数为4～7隔膜。小型分生孢子大小为6.1×14.6～1.5×4.0μm,卵形或椭圆形,0～1个隔膜。菌落生长10d产生厚垣孢子,厚垣孢子间生或顶生,多数单生,球形,细胞壁粗糙,直径7～10μm。对ITSl-5.8SrDNA-ITS4序列测序结果与GeneBank中的序列进行同源性比较发现该菌株与Fusarium oxysporum的同源性高达100%。根据形态学特征和分子鉴定结果,确认该病原菌为Fusarium oxysporum Schl。对F.oxysporum生物学特性研究结果表明:在有无光照或连续光照的条件下病菌均可生长和产孢,12h光暗交替最有利于菌丝的生长,连续黑暗培养促进小分型分生孢子萌发。F.oxysporum在15～35℃的范围内均能生长,25℃为菌丝生长和大小型分生孢子萌发的最适温度。菌丝在pH值为4～10的PDA培养基上菌丝均能生长,其中以pH6～7生长最快;大型和小型分生孢子在pH4～10范围内均可萌发,萌发最适pH值为6。病菌能够有效利用多种碳源和氮源,在无碳或无氮条件下也能生长,不同碳源和氮源对F.oxysporum菌丝生长和产孢有显著的影响。病原菌以半乳糖为碳源,以氯化铵、尿素为氮源时生长最好,半乳糖和硝酸钙有利于该菌产生分生孢子。病原菌菌丝和分生孢子的致死温度分别为60℃,10min和65℃,10min。在PDA平板上进行的抑菌试验结果表明,供试6种药剂在设置的不同浓度下对病原菌的生长都有一定的抑制作用,其中以8%蔬宝可湿性粉剂最好,EC50为1.1619μg/ml,65%代森锌可湿性粉剂抑菌效果最差,EC50为56.2941μg/ml。田间小区防治枯萎病试验结果表明,药剂单独处理土壤、种子以及药剂同时处理土壤和种子均有防病效果。在药剂单独处理土壤试验中,以98%大扫灭（Dazomet）粉剂防病效果最好,防效达到51.79%;在药剂单独处理种子试验中,以2.5%适乐时种衣剂防病效果最好,防效为44.47%。在药剂同时处理土壤和种子试验中,以98%大扫灭粉剂处理土壤和0.36%苦参碱水剂处理种子、98%大扫灭粉剂处理土壤和2.5%适乐时种衣剂处理种子防病效果最好,防效分别为63.89%和60.27%。大田期植株根部施药防病结果表明,以哈茨木霉菌株（Th-B）处理土壤和8%蔬宝可湿性粉剂灌蔸防病效果最好,防效分别为68.81%和59.04%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1 毛喉鞘蕊花概述
• 2 镰刀菌枯萎病的发生与危害
• 3 镰刀菌的病原学研究进展
• 3.1 镰刀菌所致病害的症状
• 3.2 镰刀菌的分类与鉴定
• 3.3 镰刀菌的生物学特性研究
• 3.4 镰刀菌毒素研究
• 3.4.1 植物病原镰刀菌毒素的类型
• 3.4.2 植物病原菌毒素的产生和测定
• 3.4.3 镰刀菌毒素的致病机制研究
• 3.5 镰刀菌防治技术研究
• 3.5.1 农业防治
• 3.5.2 化学防治
• 3.5.3 生物防治
• 4 研究目的及意义
• 第二章 毛喉鞘蕊花枯萎病病原分离与鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 毛喉鞘蕊花枯萎病病根和病茎的采集、菌株分离培养与纯化
• 1.1.1 毛喉鞘蕊花枯萎病病样采集
• 1.1.2 病原菌的分离培养
• 1.1.3 分离物的纯化
• 1.2 病原菌致病性测定
• 1.2.1 毛喉鞘蕊花的种植
• 1.2.2 镰刀菌分生孢子悬浮液接种
• 1.2.3 镰刀菌毒素滤液接种
• 1.2.4 病原菌的再分离
• 1.3 病原菌的形态学鉴定
• 1.3.1 供试培养基
• 1.3.2 菌落、分生孢子及厚垣孢子形态观察
• 1.3.3 镰刀菌产孢表型观察
• 1.3.4 形态学鉴定依据
• 1.4 rDNA-ITS分子鉴定
• 1.4.1 菌丝体的培养与收集
• 1.4.2 DNA提取
• 1.4.3 扩增引物
• 1.4.4 PCR反应体系与反应条件
• 1.4.5 序列分析
• 2 结果与分析
• 2.1 病原菌的分离和纯化
• 2.2 致病性测定
• 2.2.1 镰刀菌分生孢子悬浮液接种
• 2.2.2 镰刀菌粗毒素滤液接种
• 2.3 菌株的形态学鉴定
• 2.3.1 PDA上培养的病菌形态观察
• 2.3.2 不同培养基上培养的菌落培养性状观察
• 2.3.3 镰刀菌产孢表型观察
• 2.3.4 形态学鉴定
• 2.4 rDNA-ITS序列分析
• 3 结论与讨论
• 第三章 毛喉鞘蕊花枯萎病菌生物学特性研究
• 1 材料与方法
• 1.1 不同光照对病原菌菌丝生长及分生孢子萌发的影响
• 1.2 不同温度对病原菌菌丝生长及分生孢子萌发的影响
• 1.3 不同pH值对病原菌菌丝生长及分生孢子萌发的影响
• 1.4 不同碳源对病原菌菌丝生长及产孢量的影响
• 1.5 不同氮源对病原菌菌丝生长及产孢量的影响
• 1.6 菌丝与分生孢子致死温度测定
• 1.7 数据统计与分析
• 2 结果与分析
• 2.1 不同光照对病原菌菌丝生长及分生孢子萌发的影响
• 2.2 不同温度对病原菌菌丝生长及分生孢子萌发的影响
• 2.3 不同pH值对病原菌菌丝生长及分生孢子萌发的影响
• 2.4 不同碳源对病原菌菌丝生长及产孢量的影响
• 2.5 不同氮源对病原菌菌丝生长及产孢量的影响
• 2.6 菌丝与分生孢子致死温度测定
• 3 结论与讨论
• 第四章 毛喉鞘蕊花枯萎病防治技术研究
• 1 材料与方法
• 1.1 室内药剂筛选
• 1.1.1 供试药剂
• 1.1.2 药剂对病原菌的室内毒力测定
• 1.1.3 数据分析
• 1.2 田间防治技术研究
• 1.2.1 试验材料和试验地
• 1.2.2 整地与植株田间管理
• 1.2.3 药剂单独处理土壤防病试验
• 1.2.4 药剂单独处理种子的防病试验
• 1.2.5 药剂同时处理土壤和种子防病试验
• 1.2.6 根部施药的防病试验
• 2 结果与分析
• 2.1 室内不同药剂对病原菌的毒力测定
• 2.2 田间防治技术研究
• 2.2.1 药剂单独处理土壤防病试验结果
• 2.2.2 药剂单独处理种子防病试验结果
• 2.2.3 药剂同时处理土壤和种子防病试验结果
• 2.2.4 根部施药防病试验结果
• 3 结论与讨论
• 参考文献
• 附录A:毛喉鞘蕊花枯萎病田间症状
• 附录B:硕士在读期间已发表的文章
• 致谢