论文题目: 黄精降血糖活性成分的提取、分离及结构鉴定
论文类型: 博士论文
论文专业: 粮食,油脂及植物蛋白工程
作者: 齐斌
导师: 谷文英
关键词: 黄精,皂苷,单体,结构鉴定,降血糖,动物模型,提取
文献来源: 江南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 黄精（Rhizoma polygonati）为百合科（Liliaceae）黄精属（Polygonatum Mill.）多年生草本植物。黄精含有多种对人体有益的化学成分,如多糖、甾体皂苷、蒽醌类、生物碱、强心苷、木脂素、维生素和氨基酸等。本文对黄精的化学成分进行了系统的研究;进行了黄精皂苷及其苷元的分离、纯化及结构鉴定;确立黄精总皂苷的提取工艺,并筛选出适合分离纯化黄精总皂苷的大孔吸附树脂型号;建立了黄精总皂苷的ELISA的检测方法;并对黄精提取物降血糖活性进行了研究。通过气相色谱-质谱联用技术,对黄精中的脂肪酸、挥发性成分进行了测定,结果表明:黄精中的脂肪酸主要是亚油酸、棕榈油酸、硬脂酸、亚麻酸、花生酸,其相对质量分数分别是38.79%、33.20%、10.45%、9.74%、2.73%。黄精挥发性成分的组成较复杂,有羧酸类、醛类、醇类、芳香类、烷烃类、酸酐等多类别的化合物,其中主要有己醛、己烯酸、正己醇,相对质量分数分别为:29.13%、14.7%、4.89%。黄精所含的氨基酸种类齐全,氨基酸总量为5.778 g/100g,必需氨基酸总含量为1.075g/100g。通过与标准品对照及利用NMR等手段确定了从黄精中提纯的皂苷元为薯蓣皂苷元。通过琥珀酸酐法进行了半抗原的改造,碳二亚胺法进行了半抗原和大分子蛋白的偶联,成功地合成了免疫原和包被原。半抗原和牛血清白蛋白及卵清蛋白的结合比分别是21:1和11:1。利用合成的免疫原免疫新西兰大白兔,获得效价为1:12800的多克隆抗体。方阵滴定法确定抗体的最佳稀释度为1:3000;包被原的最佳稀释度为1:10000,包被原工作浓度为1.25μg/mL。首次利用所制备的兔抗薯蓣皂苷多克隆抗体建立检测黄精皂苷的ELISA方法。其标准曲线在5.105×10-3～3.972×10-1μg/ml线性范围内呈相关性,回归方程I=32.021LogC+189.02,相关系数R2=0.9974。最低检测下限I10为2.468×10-3μg/ ml。并进行了ELISA分析条件的优化。ELISA检测方法测定黄精皂苷的结果表明:批内误差和批间误差的变异系数皆小于10%;样品的回收率在80.33～103.88%之间,变异系数﹤3%。与人参皂苷和强心甙的交叉反应率分别为3.24%和7.68%,对黄精总皂苷的特异性较高。通过ELISA方法,测得黄精中总皂苷含量为0.1366%（以薯蓣皂苷记）。通过正交实验,确定了黄精总皂苷提取最优工艺参数为:提取温度80oC、乙醇浓度80%、提取时间180min、料液比1:20。通过对8种大孔吸附树脂静态吸附特性的研究,确定了LSA-30大孔吸附树脂是一种黄精总皂苷理想的吸附剂。通过进一步对LSA-30型树脂的动态吸附特性的研究,LSA-30型树脂在上样液浓度0.5～0.85mg/ml,洗脱剂流速3ml/min时,对黄精总皂苷
论文目录:
中文摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 黄精的资源分布
1.2 黄精的分类学及生物学特性
1.3 黄精的药用研究历史
1.4 黄精的药理学研究进展
1.4.1 降血糖作用
1.4.2 降血脂的作用
1.4.3 抗衰老作用
1.4.4 抗辐射作用
1.4.5 提高学习和改善记忆的作用
1.4.6 抗炎、抗病原微生物作用
1.4.7 抗肿瘤作用
1.4.8 免疫激发作用的转化率
1.5 临床应用
1.5.1 治疗糖尿病
1.5.2 用于结核病
1.5.3 用于呼吸系统疾病
1.5.3.1 呼吸道继发性霉菌感染
1.5.3.2 慢性支气管炎
1.5.3.3 百日咳
1.5.3.4 肺心病
1.5.4 用于心血管系统疾病
1.5.4.1 冠心病
1.5.4.2 高血压
1.5.4.3 低血压
1.5.4.4 高脂血症
1.5.5 用于消化系统疾病
1.5.5.1 慢性肝炎
1.5.5.2 萎缩性胃炎
1.5.5.3 慢性腹泻
1.5.6 用于神经系统疾病
1.5.6.1 缺血性脑血管病
1.5.6.2 脑功能减退症
1.5.6.3 植物神经功能失调
1.5.7 用于五官科疾病
1.5.7.1 慢性咽炎
1.5.7.2 中毒性耳聋
1.5.7.3 近视
1.5.7.4 病毒性角膜炎
1.5.7.5 癌症化疗后口腔溃疡
1.5.8 用于白细胞减少症
1.5.9 用于外生殖器感染
1.5.10 用于足癣、甲癣
1.5.11 用于蛲虫病
1.5.12 用于男性不育症
1.5.13 用于流行性出血热
1.6 黄精的化学成分研究现状
1.6.1 甾体皂苷
1.6.2 黄精多糖
1.6.3 黄酮、蒽醌
1.6.4 强心苷
1.6.5 木脂素
1.6.6 氨基酸
1.7 黄精的降血糖成分的研究现状
1.8 黄精开发利用的途径
1.8.1 开发具有明显药理作用的天然药物
1.8.2 黄精在保健食品中的应用
1.8.3 黄精作为观赏园林植物
1.9 立题背景及意义
1.10 主要研究内容
参考文献
第二章 黄精的基本化学成分组成分析
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 主要实验材料与设备
2.2.1.1 材料与试剂
2.2.1.2 主要仪器与设备
2.2.2 实验方法
2.2.2.1 水分测定
2.2.2.2 蛋白质测定
2.2.2.3 粗脂肪测定
2.2.2.4 微量元素的测定
2.2.2.5 脂肪酸的测定
2.2.2.6 黄精挥发性成分的测定
2.2.2.7 黄精中氨基酸的测定
2.2.2.8 黄精皂苷元的提取、分离和鉴定
2.3 结果与讨论
2.3.1 水分、蛋白质和脂肪的含量测定结果
2.3.2 微量元素的测定结果
2.3.3 脂肪酸的测定结果
2.3.4 黄精的挥发性成分
2.3.5 氨基酸的测定结果
2.3.6 黄精皂苷及皂苷元的初步分析结果
2.3.6.1 黄精皂苷种类的初步分析结果
2.3.6.2 黄精皂苷元的分析结果
2.4 本章小结
参考文献
第三章 黄精皂苷抗体制备及酶联免疫检测方法的建立
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 试剂、仪器与免疫供试动物
3.2.1.1 试剂
3.2.1.2 仪器
3.2.1.3 免疫用动物
3.2.2 供试液的准备
3.2.3 黄精总皂苷ELISA 检测方法的建立
3.2.3.1 人工抗原的合成与鉴定
3.2.3.2 抗体的制备
3.2.3.3 抗体的纯化
3.2.3.4 ELISA 基本条件建立
3.2.3.5 ELISA 分析条件的优化
3.2.3.6 标准抑制曲线的建立
3.2.3.7 ELISA 检测方法的评价
3.2.3.8 黄精总皂苷的检测
3.3 结果和讨论
3.3.1 半抗原的鉴定
3.3.2 人工抗原的鉴定
3.3.2.1 人工抗原、半抗原和载体蛋白的紫外吸收扫描
3.3.2.2 人工抗原中半抗原与载体的结合比率
3.3.3 抗体效价的测定
3.3.3.1 ELISA 基本条件建立
3.3.3.2 抗体效价的确定
3.3.4 ELISA 分析条件的优化
3.3.4.1 有机溶剂对抗体活性的影响
3.3.4.2 不同浓度甲醇对ELISA 检测的影响
3.3.4.3 pH 对ELISA 分析的影响
3.3.4.4 离子强度对ELISA 分析的影响
3.3.5 标准抑制曲线的建立
3.3.6 ELISA 检测方法的评价
3.3.6.1 ELISA 方法的加样回收率
3.3.6.2 ELISA 方法的精密度试验
3.3.6.3 ELISA 方法的交叉反应率
3.3.7 黄精皂苷的测定结果
3.4 本章小结
参考文献
第四章 黄精皂苷的提取工艺筛选
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 主要实验材料与设备
4.2.1.1 材料与试剂
4.2.1.2 仪器与设备
4.2.2 实验方法
4.2.2.1 原料处理
4.2.2.2 黄精总皂苷的测定方法
4.2.2.3 树脂的处理
4.2.2.4 黄精总皂苷提取工艺参数的确定
4.2.2.5 供试液的制备
4.2.2.6 大孔吸附树脂对黄精总皂苷的静态吸附实验
4.2.2.7 LSA-30 大孔吸附树脂对黄精总皂苷的动态吸附实验
4.3 结果与讨论
4.3.1 黄精总皂苷提取最佳工艺参数的确定
4.3.1.1 单因素实验
4.3.1.2 黄精总皂苷提取条件的优化
4.3.2 大孔吸附树脂对黄精总皂苷吸附实验结果
4.3.2.1 大孔吸附树脂对黄精总皂苷的静态吸附实验结果
4.3.2.2 LSA-30 大孔吸附树脂对黄精总皂苷的动态吸附实验结果
4.4 本章小结
参考文献
第五章 黄精降血糖最强组分的追踪
5.1 引言
5.2 材料与方法
5.2.1 受试样品
5.2.2 试验动物及饲养
5.2.3 糖尿病模型的制备
5.2.4 主要仪器
5.3 实验方法
5.3.1 皂苷的检测
5.3.2 黄精总皂苷的提取、分离和纯化
5.3.2.1 黄精的乙醇提取物
5.3.2.2 黄精正丁醇提取物
5.3.2.3 黄精总皂苷的粗分―大孔吸附树脂法
5.3.2.4 黄精提取物饲喂实验降血糖效果的观察
5.3.2.5 黄精提取物腹腔给药后降血糖效果的观察糖
5.4 结果与讨论
5.4.1 黄精乙醇提取物对正常小白鼠的影响
5.4.2 黄精乙醇提取物对糖尿病模型小白鼠的影响
5.4.3 黄精正丁醇提取物对正常小鼠和糖尿病模型小鼠血糖值的影响结果
5.4.4 大孔树脂吸附黄精总皂苷乙醇洗脱不同组分对正常小鼠和糖尿病模型小鼠血糖值的影响结果
5.5 本章小结
参考文献
第六章 黄精皂苷单体的分离、纯化及结构鉴定
6.1 引言
6.2 材料与方法
6.2.1 实验材料与设备
6.2.1.1 材料与试剂
6.2.1.2 仪器与设备
6.2.2 黄精皂苷的纯化-ODS 柱
6.2.3 黄精皂苷单体的结构鉴定
6.2.3.1 质谱法
6.2.3.2 核磁共振法
6.3 结果与讨论
6.3.1 化合物B 的结构鉴定
6.3.2 化合物C 的结构鉴定
6.3.3 化合物D 的结构鉴定
6.3.4 化合物E 的结构鉴定
6.3.5 化合物F 的结构鉴定
6.3.6 化合物G 的结构鉴定
6.4 本章小结
参考文献
论文主要结论
论文创新点
攻读博士期间发表与课题相关论文
致谢
附录(核磁共振图谱)
发布时间: 2006-07-20
参考文献
- [1].多酚型大孔吸附树脂的制备及吸附机理的研究[D]. 张力平.北京林业大学2005
- [2].生物碱吸附分离规律研究[D]. 李音.浙江大学2013
- [3].核黄素结晶分离纯化研究[D]. 李文钊.天津大学2007
相关论文
- [1].乌龙茶多糖的形成特征、结构、降血糖作用及其机理[D]. 倪德江.华中农业大学2003
- [2].沙蒿多糖结构及降血糖作用研究[D]. 张继.西北师范大学2005
- [3].姬松茸菌丝体中抗肿瘤、免疫活性多糖的研究[D]. 姜荷.江南大学2005
- [4].红车轴草异黄酮的分离、纯化、结构鉴定及生理功能研究[D]. 陈寒青.江南大学2005
- [5].茶多糖的分离纯化、结构及构效关系研究[D]. 王元凤.江南大学2005
- [6].苦瓜中降血糖活性成分的高通量筛选研究[D]. 何新益.湖南农业大学2006
- [7].具有降血糖活性的茶多糖组分分离纯化与结构鉴定[D]. 王黎明.江南大学2006
- [8].玉竹甾体皂苷活性成分和分蘖葱头黄酮类活性成分及工艺研究[D]. 张沐新.吉林大学2007