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护卵汤对免疫性卵巢早衰模型小鼠CD4+CD25+Treg和FoxP3表达的影响

2020-12-07阅读(366)

护卵汤对免疫性卵巢早衰模型小鼠CD4+CD25+Treg和FoxP3表达的影响

论文摘要

目的：本研究运用现代科研方法,结合病理学和分子生物学知识,从免疫方面入手,初步探讨中药护卵汤对免疫性POF的作用机理。方法：1.复习了中西医对POF的认识、治疗、研究现状,着重介绍CD4+CD25+Treg和FoxP3在自身免疫性疾病中的作用和机理。制定出从CD4+CD25+Treg和FoxP3方面深入探讨护卵汤治疗免疫性POF作用机理的实验研究方案。2.根据POF的病理机制,用小鼠透明带ZP3第330-342个氨基酸序列（NSSSSQFQ IHGPR）为免疫原建立免疫性POF小鼠动物模型,并用护卵汤对其进行干预,运用光镜、酶联免疫（ELISA）.流式细胞技术、免疫组化、RT-PCR.Western-Blot等技术检测卵巢形态的改变、抗透明带抗体、CD4+CD25+Treg和FoxP3的表达及变化.结果：1.模型组：逐渐出现动情周期紊乱,时间相对较早,动情间期延长,阴道细胞涂片主要表现为大量白细胞及少量有核上皮细胞；卵巢体积缩小,成熟卵泡少,卵泡颗粒细胞层较正常减少,排列紊乱,部分卵泡发育不良,卵巢间质可见较多淋巴细胞及浆细胞浸润；外周血中AzpAb阳性,水平升高；卵巢重量、胸腺重量指数降低,脾重指数增加；CD4+CD25+Treg细胞数量减少；FoxP3的基因和蛋白表达均减弱。2.护卵汤组：POF小鼠较上述模型组的情况均有不同程度改善,高剂量组比中、低剂量组疗效明显,具体表现为：动情周期紊乱时间出现相对晚,主要表现为动情周期延长,动情期角化细胞减少,动情周期延长至8-10天；较模型组比较,卵巢体积稍增大,发育成熟卵泡较多。卵泡颗粒细胞层增多,少部分卵泡发育不良,卵巢间质见少量淋巴细胞及浆细胞浸润。外周血中AzpAb阳性,但水平明显降低；卵巢重量、胸腺重量指数明显升高；脾重指数明显降低；CD4+CD25+Treg细胞数量增加；FoxP3的基因和蛋白表达均增强。结论：POF的主要病因病机是肾虚胞阻,补肾通络是其基本治则；本实验建立的动物模型与人POF相接近,是研究POF较为理想的动物模型；护卵汤对免疫性卵巢早衰动物的卵巢功能、免疫功能具有一定的改善作用。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 缩略词表
  • 引言
  • 正文
  • 第一部分 文献研究
  • 1. 中医学对卵巢早衰的认识及研究概况
  • 1.1 中医病因病机探讨
  • 1.2 中医药治疗进展
  • 2. 现代医学对免疫性卵巢早衰的认识及研究概况
  • 2.1.自身免疫性卵巢早衰的发病机制
  • +CD25+调节性T细胞与卵巢早衰'>2.2 CD4+CD25+调节性T细胞与卵巢早衰
  • 第二部分 实验研究
  • 第一 护卵汤对免疫性卵巢早衰模型小鼠形态学和免疫学的影响
  • 1. 动物与材料
  • 1.1 动物
  • 1.2 药物与试剂
  • 1.3 主要溶液配制
  • 1.4 主要仪器
  • 2. 实验方法
  • 2.1 动物模型的建立
  • 2.2 分组和给药
  • 2.3 阴道脱落细胞涂片观察小鼠性周期
  • 2.4 取材
  • 2.5 AzpAb检测
  • 2.6 大鼠卵巢、胸腺、脾脏重量测定
  • 2.7 卵巢组织形态学观察
  • 2.8 统计方法
  • 3. 结果
  • 3.1 各组小鼠性周期的改变
  • 3.2 各组小鼠血清AzpAb的变化
  • 3.3 小鼠卵巢指数、胸腺指数、脾脏指数
  • 3.4 卵巢形态学变化
  • +CD25+Treg细胞的影响'>第二 护卵汤对免疫性POF模型小鼠脾脏中CD4+CD25+Treg细胞的影响
  • 1. 动物与材料
  • 1.1 动物及造模方法
  • 1.2 药物与试剂
  • 1.3 主要仪器
  • 2. 实验方法
  • 2.1 动物模型
  • 2.2 分组和给药
  • 2.3 取材
  • +CD25+Treg细胞'>2.4 流式细胞仪检测小鼠脾脏中CD4+CD25+Treg细胞
  • 2.5 统计学分析
  • 3 结果
  • 第三 护卵汤对免疫性POF小鼠FoxP3mRNA和蛋白表达的影响
  • 1.动物与材料
  • 1.1 动物及造模方法
  • 1.2 药物与试剂
  • 1.3 主要仪器
  • 1.4 主要溶液配制
  • 2. 实验方法
  • 2.1 动物模型
  • 2.2 分组和给药
  • 2.3 取材
  • 2.4 免疫组化法检测免疫性POF模型小鼠卵巢FoxP3蛋白的表达
  • 2.5 RT-PCR法检测免疫性POF模型小鼠卵巢FoxP3mRNA表达
  • 2.6 Western-blot法检测免疫性POF模型小鼠卵巢FoxP3蛋白的表达
  • 2.7 统计学分析
  • 3. 结果
  • 3.1 护卵汤对免疫组化检测的FoxP3蛋白表达的影响
  • 3.2 护卵汤对RT-PCR检测的FoxP3mRNA表达的影响
  • 3.3 护卵汤对Western-Blot检测的FoxP3蛋白表达的影响
  • 第三部分 讨论
  • 1. 卵巢早衰病因病机探讨
  • 1.1 肾虚胞阻是卵巢早衰的主要病因病机
  • 1.2 补肾通络为治疗卵巢早衰的基本治则
  • 1.3 护卵汤单味药选用依据
  • 1.4 护卵汤方义分析
  • 2 免疫性卵巢早衰动物模型的建立
  • 2.1 免疫性卵巢早衰动物模型进展
  • 2.2 本实验模型评估
  • 3 护卵汤对免疫性POF模型小鼠卵巢形态学影响
  • 4 护卵汤对免疫性POF模型小鼠免疫学的影响
  • 4.1 护卵汤对小鼠脾脏指数、胸腺指数的影响
  • 4.2 护卵汤对免疫性POF小鼠外周血中AzpAb的影响
  • +CD25+Treg的影响'>5. 护卵汤对免疫性POF小鼠脾脏中CD4+CD25+Treg的影响
  • 6. 护卵汤对免疫性POF小鼠卵巢组织中FoxP3基因和蛋白表达的影响
  • 结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附录
  • 一.附图
  • 二.文献综述
  • 三.研究生在读期间论文科研情况

    • 相关论文文献

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