论文题目: 新神经递质胍丁胺作用的分子机制及其新靶点的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 药理学
作者: 翁谢川
导师: 郑建全,肖文彬
关键词: 胍丁胺,膜片钳技术,钙通道,海马神经元,人胚肾细胞,咪唑啉受体,肾上腺素受体,酸感受离子通道
文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院
发表年度: 2005
论文摘要: 胍丁胺作为一种新发现的神经递质,具有广泛的生物学功能和许多重要的药理学作用。我单位的研究证实,胍丁胺具有明显的抗炎症、抗焦虑、抗抑郁、抗肿瘤以及神经元保护作用等作用。但是,关于胍丁胺对细胞膜上电压门控性钠、钾、钙离子通道的作用情况尚不清楚。另外,在肿瘤、炎症、缺血、缺氧等许多病理条件下都伴随着pH值的下降而引起的酸感受离子通道（ASIC）的激活,胍丁胺是否发挥调节ASIC的功能也未见报道。 本实验以原代培养的新生大鼠海马神经元为标本,使用膜片钳全细胞记录技术,并采用了压力注射给药方法,观察了胍丁胺对电压门控性钠、钾、钙离子通道和ASIC的影响,为进一步阐明胍丁胺作用的分子机制和可能的新靶点提供实验依据。实验结果表明: 1.胍丁胺对大鼠海马神经元电压门控性钠、钾、钙离子通道的作用及其可能的受体机制 胍丁胺（500μM）对TTX敏感的钠、钾通道没有显著的作用。胍丁胺能以浓度依赖性和电压依赖性离子通道方式抑制钙电流,其IC50为1.18±0.37μM。胍丁胺与育亨宾（10μM）合用时对钙电流抑制率没有明显的改变,与咪唑克生（10μM）联用时,胍丁胺对钙电流的抑制率明显的降低。 2.L-型钙通道α1C/β1B/α2δ亚单位在HEK-293细胞的功能表达及胍丁胺对其作用的研究 对HEK-293细胞上转染表达的功能性的L-型钙通道电流的电生理药理特性进行了分析:在药理学特性方面,L-型钙通道选择性拮抗剂维拉帕咪1μM能可逆的阻断该电流;维拉帕咪10μM可以对其进行不可逆的阻断。L-型钙通道选择性拮抗剂硝苯地平10μM可阻断电流;在通道的动力学上,L-钙通道在-40 mV时激活,反转电位在60 mV,L-钙电流衰减呈明显电压依赖性,半数失活电压为V1/2=-2.48 mV,常数k=1.83。胍丁胺以浓度依赖性和电压依赖性方式抑制L-型钙电流,其IC50值为50.86±13.59μM。 3.海马神经元表达的两种ASIC电流及胍丁胺与其同系物对两种电流的作用 在海马神经元上,我们首次发现存在着两种ASIC电流。首先,这两种电流在海马神经
论文目录:
缩略语表
中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
1.新生大鼠海马神经元的分离和培养
2.HEK293细胞的复苏、传代、培养、冻存和质粒的转染
3.玻璃微电极制备
4.电生理记录液的配制
5.全细胞电流的记录
6.药物和给药方法
7.数据的采集和分析
实验结果
第一部分 胍丁胺对原代培养的大鼠海马神经元电压门控性离子通道的作用
1.培养的大鼠海马神经元的形态观察
2.大鼠海马神经元电压门控性离子通道电流
3.大鼠海马神经元电压门控性钠电流
4.大鼠海马神经元电压门控性钾电流的分离
5.大鼠海马神经元电压门控性钙电流
6.胍丁胺对海马神经元的电压门控性钠、钾电流的作用
7.胍丁胺对海马神经元分离钾电流I_A和I_K的作用
8.胍丁胺对海马神经元钙电流I_(Ca)的阻断作用
9.胍丁胺对海马神经元钙电流I_(Ca)阻断作用的分析
10.胍丁胺对海马神经元钙电流阻断I_(Ca)的电压依赖性
小结与讨论
第二部分 胍丁胺对大鼠海马神经元钙电流作用及可能的分子机制
1.胍丁胺抑制维拉帕咪作用之后的钙电流
2.育亨宾和咪唑克生对钙电流的作用
3.育亨宾不影响胍丁胺对钙电流的抑制作用
4.咪唑克生降低胍丁胺抑制钙电流的抑制率
小结与讨论
第三部分 L-型钙通道α1C／β1B／α2δ亚单位在HEK-293细胞的功能表达及胍丁胺对其作用的研究
1.HEK-293细胞的形态观察
2.转染前HEK细胞内源性电流的记录
3.转染L-type钙通道α_(1C)／β_(1B)／α_2δ亚单位后电流的记录分析
4.维拉帕咪和硝苯地平对转染钙电流的特异性阻断作用
5.L-type 钙通道的衰减常数分析
6.转染L-tyPe钙通道的失活曲线分析
7.肌丁胺对转染L.型钙通道的抑制作用
8.肌丁胺对L-型钙电流的阻断作用具有明显的电压依赖性
9.咪哇克生对孤丁胺抑制HEK293细胞表达的L-型钙电流作用的影响
小结和讨论
第四部分海马神经元表达的两种不同类型的ASIC电流及孤丁胺与其同系物对两种电流的作用
1.海马神经元ASIC电流的诱发
2.培养海马神经元ASIC电流的I-V曲线关系
3.胺氮毗味‘a班iloride)对两种AsIC的阻断作用
4.两种AsIC电流对pH的依赖性
5.肌丁胺及其同系物对两种ASIC电流的作用
小结和讨论
讨论
结论
参考文献
致谢
个人简历
综述
呱丁胺中枢作用的复杂性及多样性
参考文献
酸感受性离子通道生物学特性研究
参考文献
发布时间: 2005-09-05
参考文献
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