论文摘要
目的:将我室构建的抗肝癌噬菌体单链抗体二聚体（scFv-BDM2）在大肠杆菌可溶性表达、纯化,并对其亲和力与特异性行初步鉴定,为下一步构建99mTc标记的scFv-BDM2及scFv-BDM2-发热磁性纳米颗粒的临床应用奠定基础。方法:1.将抗肝癌scFv-BDM2由E.coli TGl转入E.coli HB2151中,IPTG诱导可溶性表达,制备大量scFv-BDM2;利用HiTrap Anti-E Tag亲和层析柱对表达的二聚体进行纯化。2.将纯化后的scFv-BDM2进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,以Bradford法测定其浓度,酶联免疫吸附实验法（ELISA）检测其生物活性和特异性;采用非竞争酶免疫技术测定上述纯化的scFv-BDM2亲和力常数,并比较其大小变化。结果:1.将抗肝癌scFv DM二聚体在E.coli HB2151大量表达并纯化后经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可见一清晰蛋白条带;经分子相对迁移率初步计算估计,目的条带的分子量约为60KD,纯化后的二聚体浓度约为16μg/ml。2.采用非竞争酶免疫法测定上述纯化的单链抗体二聚体的活性效价和亲和力常数分别为1:64、3.735×107mol/L-1,而scFv DM的亲和力常数为2.44×107mol/L（-1）,二聚体的亲和力为scFv DM的1.53倍。以ELISA法对所获阳性克隆的特异性分析发现,抗肝癌scFv-BDM2均与三种肝癌细胞结合,而与正常肝细胞、胃癌细胞和膀胱癌细胞不结合。结论:经大肠杆菌表达及亲和层析纯化后获得一定浓度的scFv DM二聚体,其亲和力较前提高,和抗肝癌噬菌体单链抗体同样具有良好的抗原结合特异性。
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标签：肝癌论文; 单链抗体论文; 二聚体论文; 表达论文; 亲和层析论文; 亲和力论文; 特异性论文; 酶联免疫吸附实验法论文;