卵巢癌相关抗原的筛选及鉴定

论文摘要

肿瘤抗原的寻找一直是肿瘤免疫学研究中面临的重要课题。Sahin 报告的SEREX(Serological analysis of recombinant eDNA expression libraries)方法是从体液免疫的角度寻找肿瘤抗原,为寻找肿瘤抗原提供了一种全新的途径。以应用于许多类型的肿瘤抗原的筛选,发现了一些新的肿瘤排斥抗原,显示出该方法具有良好的应用前景。卵巢癌在女性恶性肿瘤中死亡率居于第一位,其中最常见的晚期上皮性卵巢癌5 年生存率长期停留在20～30%左右,其主要原因是卵巢癌发病部位隐蔽,难以早发现,早治疗,预后差。目前的诊断方法有限,寻找新的更具优势的肿瘤抗原用于诊断是急需研究的课题。用SEREX 方法筛选卵巢癌肿瘤抗原的研究在国内外较少。本研究所用卵巢癌eDNA 表达文库由本课题组构建,该文库已应用SEREX 和SSH 相结合的筛选肿瘤抗原基因的技术策略,并获得了180 个卵巢癌肿瘤抗原基因克隆。本文对其中45 个卵巢癌候选抗原基因在34 例卵巢癌患者和34 例正常人血清中相应IgG,IgM 抗体的检测、分析发现,其中6 个抗原克隆的IgG 血清抗体的阳性率均明显的高于相应正常人血清中的阳性率,4 个抗原克隆的IgM 血清抗体的阳性率均明显的高于相应正常人血清中的阳性率。分析筛选的阳性卵巢癌抗原与卵巢癌患者的临床病理关糸发现,lO 个卵巢癌抗原在卵巢癌血清中的自身抗体与其病理学类型及组织学分级无相关性。分析这些抗原的自身IgG抗体与卵巢癌临床分期的关系发现,不同抗原的抗体在卵巢癌的不同期别可发生明显的升高。这些结果说明卵巢癌的发生是一个多阶段、多步骤、多基因参与的过程。我们的研究发现数个卵巢癌抗原的血清IgM 抗体在卵巢癌早期阶段就发生了明显的升高,提示这些肿瘤抗原的自身抗体可能成为卵巢癌早期诊断的血清学标志物。本研究把10 个抗原克隆联合起来分析发现,分别用IgG 抗体和IgM 抗体检测都能提高卵巢癌诊断的敏感性和特异性:而同时用IgG 抗体和IgM 抗体检测,则能够在保证特异性不变的前提下,明显提高了诊断的敏感性和准确性。这个发现为将来研究卵巢癌肿瘤标志物,用以诊断卵巢癌提供了一个新的方向。得到的其中7 个阳性克隆的序列进行生物信息学分析,经与GeneBank 和SEREX 数据库比较、分析发现这7 个卵巢癌候选肿瘤抗原基因可以分为4 类:①1 个与已知卵巢癌相关基因同源的基因,可能是乳腺癌或卵巢癌癌性突变的靶位;②3 个与一些具特殊功能蛋白的基因同源的基因:③2 个可能与细胞生长、分化功能有关的基因;④1 个在GeneBank 中无同源序列的新基因。初步分析这些基因均是具有不同功能的功能性基因。

论文目录

• 致谢
• 主要英文缩写
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章:前言（文献综述）
• 1 卵巢癌流行病及病因学
• 2 卵巢癌病理分子生物学
• 2.1 癌基因
• 2.2 抑癌基因
• 2.3 信号传递糸统
• 3 卵巢癌诊断及病程监测概述
• 3.1 卵巢癌诊断
• 3.2 卵巢癌病程监测概述
• 4 卵巢癌治疗概况
• 4.1 卵巢癌的手术治疗
• 4.2 卵巢癌化学药物治疗的现状
• 5 卵巢癌相关的免疫学研究进展
• 5.1 肿瘤抗原
• 5.2 抗卵巢癌免疫的效应机理
• 5.3 卵巢癌的免疫监视及逃逸分子机理
• 5.4 卵巢癌患者免疫功能的变化
• 5.5 卵巢癌的免疫治疗现况
• 6 本研究的前期工作基础、目的与意义
• 第二章:卵巢癌相关抗原的异体血清筛选
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第三章:筛选出的卵巢癌抗原的相关生物信息学分析
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第四章:多拷贝毕赤酵母表达载体的改造
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第五章:Ocy-100 抗原基因的克隆与表达
• 1 前言
• 2 实验材料
• 3 实验方法
• 4 结果
• 5 讨论
• 小结
• 参考文献