基于酵母双杂交技术的PPARg激动剂和拮抗剂的筛选

论文摘要

Ⅱ型糖尿病是一种代谢调节障碍的渐进性疾病,以胰岛素耐受和胰岛素分泌削弱为特点,近年来患病人口在世界范围内急剧增加,在我国也已进入高发期,严重危害了人们的生活健康。过氧化物酶体增殖因子活化受体（PPAR）是核受体家族的一个成员,在脂肪和糖代谢平衡中起重要作用。PPARγ是PPAR 家族中的一种亚型,为多种疾病如糖尿病、炎症、高血脂症、高血压以及癌症等药物设计的重要靶标,尤其在抗II-型糖尿病的药物研发中发挥着重要作用。本文首次成功利用酵母双杂交技术构建了PPARγ激动剂和拮抗剂的筛选模型,并申请了专利（专利申请号:200410093185.1）。由于PPARγ激动剂能诱导PPARγ配体结合域（LBD）与共激活因子CBP 的结合, 因此通过检测化合物对PPARγLBD 与CBP 间相互作用的影响可以完成PPARγ激动剂激动效应的评价。阳性激动剂的测评结果显示,我们所构建的酵母水平的筛药模型是可靠的,对目前所知的四大类PPARγ激动剂均能产生灵敏反应,可以用来筛选具有新颖

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 引言
• 1 糖尿病的分类和目前治疗情况
• 2 PPARγ是抗II -型糖尿病药物设计的一个重要靶点
• 2.1 PPAR 的发现、命名与亚型
• 2.2 PPAR 的结构与功能
• 2.3 PPAR 的转录激活功能
• 2.4 PPARγ的激动剂
• 2.5 PPARγ的拮抗剂
• 3 PPARγ药物筛选方法的介绍
• 3.1 传统筛选方法的介绍
• 3.2 酵母双杂交筛选方法的可行性
• 第二章 PPARγ激动剂酵母筛选平台的构建
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 2 结果与讨论
• 2.1 CBP 酵母表达质粒pGADT7-CBP 的构建
• 2.2 PPARγLBD 酵母表达质粒pGBKT7-PPARγLBD 的构建
• 2.3 含pGADT7-CBP 和pGBKT7-PPARγLBD 双质粒的酵母菌P1C2 的构建
• 第三章 PPARγ激动剂和拮抗剂酵母水平筛选平台的评价与应用
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 2 结果与讨论
• 2.1 PPARγ激动剂的酵母筛选平台的可行性检测
• 2.2 PPARγ激动剂的酵母筛选平台的优化
• 2.3 阳性激动剂在酵母筛选平台上EC50 的测定
• 2.4 PPARγ拮抗剂酵母筛选平台的评价
• 2.5 应用酵母筛选平台进行药物初筛
• 第四章结论
• 参考文献
• 在研期间发表的文章及专利申请目录
• 致谢
• 附:目前工作-基于人葡萄糖激酶的激动剂筛选
• 1 引言
• 1.1 葡萄糖激酶的分布和基因结构
• 1.2 葡萄糖激酶在糖代谢中的作用
• 1.3 葡萄糖激酶与糖尿病
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 LGK1 原核表达载体 PQE30-LGK1 的构建
• 3.2 His-LGK1 的表达与纯化
• 3.3 His-LGK1 的酶活测定
• 4 参考文献