南瓜蛋白诱导K562细胞凋亡的分子机制及协同STI571抗K562细胞作用的研究

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药物治疗是恶性肿瘤的三大疗法之一。近年来,诱导凋亡和分化疗法为肿瘤的药物治疗开辟了新的途径,也取得了一定成效,但仍缺乏理想的诱导凋亡和分化的药物。对天然活性物质进行抗肿瘤作用的研究,尤其在诱导凋亡和分化方面进行探索,将有助于获得理想的抗肿瘤药物。植物来源的核糖体失活蛋白（ribosome-inactivating proteins, RIPs）具有抗生育、抗病毒和抗肿瘤等多种生物学活性,其抗肿瘤活性尤其受到关注。南瓜蛋白（Cucurmosin）是本课题组从南瓜的瓜瓤中提取的一种新的RIP,本文将对其体内外抗肿瘤活性及抗肿瘤机制进行研究,旨在为其潜在的抗肿瘤临床应用提供理论基础和实验依据。一、Cucurmosin体内外抗肿瘤活性及诱导K562细胞凋亡的研究体外试验（in vitro）结果表明,Cucurmosin对人慢性粒细胞白血病细胞株K562和小鼠黑色素瘤细胞株B16具有较强的杀伤作用,呈明显的量效和时效关系。MTT法检测表明,阳性对照药天花粉蛋白（TCS）抑制K562细胞增殖的IC50值比Cucurmosin大4倍多,提示Cucurmosin对肿瘤细胞的体外杀伤作用强于TCS。体内试验（in vivo）结果表明,Cucurmosin对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌移植性实体瘤具有明显抑制作用,作用呈剂量依赖性。对B16黑色素瘤和Lewis肺癌的最大抑瘤率分别为55.2%和65.5%。用药期间未观察到明显的毒性作用,说明Cucurmosin具有良好的体内抗肿瘤活性。以K562细胞作为研究对象,观察Cucurmosin促凋亡作用。形态学观察（AO/EB荧光双染法、电镜超微结构观察）发现,K562细胞出现染色质浓

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前言

第一部分南瓜蛋白体内外抗肿瘤活性及诱导K562 细胞凋亡的研究

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

1.2 动物与瘤株

1.3 细胞株

1.4 细胞培养

1.5 MTT 法检测南瓜蛋白的细胞毒作用

1.6 小鼠移植性肿瘤接种及传代

1.7 南瓜蛋白对小鼠移植性肿瘤的抑制作用

1.8 统计学分析

1.9 南瓜蛋白诱导K562 细胞凋亡的观察

2 结果

2.1 南瓜蛋白对K562 和816 细胞株的体外细胞毒作用

2.2 南瓜蛋白对小鼠移植性实体瘤的抑制作用

2.3 南瓜蛋白对K562 细胞凋亡的影响

3 讨论

第二部分南瓜蛋白诱导K562 细胞凋亡分子机制的探讨

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

1.2 细胞株及培养条件

cr/abl 蛋白的表达'>1.3 Western blot 法检测K562 细胞P210b^cr/abl蛋白的表达

1.4 RT-PCR 检测K562 细胞bcr/alb mRNA 的表达

1.5 流式细胞术检测线粒体膜电位

1.6 不含线粒体的细胞浆分离和细胞色素C 的Western blot 法观察

1.7 Western blot 法检测Bcl-xL、Bax、caspase-3、c-Myc 和Hsp90 的表达

2 结果

cr/abl蛋白表达的影响'>2.1 南瓜蛋白对K562 细胞P210^cr/abl蛋白表达的影响

2.2 南瓜蛋白对K562 细胞bcr/abl mRNA 表达的影响

2.3 南瓜蛋白对K562 细胞线粒体膜电位的影响

2.4 南瓜蛋白对K562 细胞胞浆Cyt-c 含量的影响

2.5 南瓜蛋白对K562 细胞Bcl-xL 和Bax 蛋白表达的影响

2.6 南瓜蛋白对K562 细胞caspase-3 活化的影响

2.7 南瓜蛋白对K562 细胞c-Myc 和Hsp90 蛋白表达的影响

3 讨论

第三部分南瓜蛋白与ST1571 的体外联合抗K562 细胞作用

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

1.2 细胞株与培养条件

1.3 南瓜蛋白联合ST1571 对K562 细胞的抑制作用

1.4 南瓜蛋白联合ST1571 诱导K562 细胞凋亡的作用

1.5 数据分析

cr/abl蛋白的表达'>1.6 Western blot 检测K562 细胞磷酸化酪氨酸-P210^cr/abl蛋白的表达

2 结果

2.1 南瓜蛋白联合ST1571 对K562 细胞抑制的协同作用

2.2 南瓜蛋白联合ST1571 诱导K562 细胞凋亡的协同作用

cr/abl 自身酪氨酸磷酸化的影响'>2.3 南瓜蛋白联合ST1571 对K562 细胞P210^cr/abl 自身酪氨酸磷酸化的影响

3 讨论

结论

参考文献（一）

致谢

综述

参考文献（二）

南瓜蛋白诱导K562细胞凋亡的分子机制及协同STI571抗K562细胞作用的研究

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