β-胡萝卜素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡与PPAR-γ信号传输及活性氧产生的联系

β-胡萝卜素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡与PPAR-γ信号传输及活性氧产生的联系

论文摘要

β-胡萝卜素作为一种天然色素,具有广泛的生理功能,特别是在抗癌方面的功能越来越受到人们的关注。许多流行病学研究显示β-胡萝卜素能降低人乳腺癌的发病率,但是对于这种化学预防作用的分子机制并不是很明确。PPAR-γ的配体能够促使乳腺癌分化和诱导其凋亡,但β-胡萝卜素与PPAR-γ蛋白和mRNA表达的关系,以及PPAR-γ信号传输在β-胡萝卜素抗癌中起的作用,至今还没有人研究。因此本论文设计研究β-胡萝卜素对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用和PPAR-γ表达之间的关系。(1)我们用Western blot和RT-PCR技术从蛋白和mRNA水平来检测β-胡萝卜素对PPAR-γ表达的影响,以及检测了β-胡萝卜素对PPAR-γ下游相关基因COX-2,P21WAF1/CIP1和P27 mRNA表达的影响,研究β-胡萝卜素与PPAR-γ的关系;(2)用MTT检测β-胡萝卜素对细胞活力的影响,用流式细胞技术和核染色技术检测细胞的凋亡,C-GFP质粒转染及激光共聚焦显微镜观察,及用Western blot检测胞浆中细胞色素C的释放;用荧光探针测细胞中活性氧水平的上升等,从形态上及分子水平研究β-胡萝卜素对乳腺癌细胞的作用,以及β-胡萝卜素通过调节PPAR-γ和活性氧在抗癌的作用中的分子机制。研究结果如下: 1.β-胡萝卜素上调PPAR-γ基因mRNA和蛋白的表达 β-胡萝卜素能呈时间效应从mRNA水平和蛋白水平显著上调PPAR-γ的表达,经β-胡萝卜素处理3天后,PPAR-γ mRNA和蛋白水平分别增加为对照组的1.7倍和3.5倍。经PPAR-γ的抑制剂GW9662预处理,能显著削弱由β-胡萝卜素引起的PPAR-γ的上调。 2.β-胡萝卜素对COX-2,P21和P27基因表达的影响 β-胡萝卜素呈时间效应下调COX-2基因的表达,上调p21WAF1/CIP1基因的表达,且PPAR-γ的抑制剂GW9662能显著削弱由β-胡萝卜素引起的COX-2,p21WAF1/CIP1的表达变化。β-胡萝卜素对P27基因表达的影响不显著。 由上面的结果可知,β-胡萝卜素不仅能上调PPAR-γ的表达,并能通过PPAR-γ信号传输调节P21和COX-2基因。 3.β-胡萝卜素对MCF-7细胞生长的抑制与诱导凋亡 用20μmol/L和50μmol/L β-胡萝卜素处理MCF-7细胞3天,细胞的活力分别为对照组的70%和50%。β-胡萝卜素对MCF-7细胞活力的抑制也呈时间效应关系,

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 1 绪论
  • 1.1 β-胡萝卜素与癌症的研究进展
  • 1.1.1 β-胡萝卜素的结构和性质
  • 1.1.2 β-胡萝卜素的功能
  • 1.1.3 癌症及乳腺癌现状
  • 1.1.4 β-胡萝卜素与癌症的研究进展
  • 1.1.5 PEAR-γ-与癌症的研究进展
  • 1.1.6 β-胡萝卜素与PPAR-γ的关系及与癌症的研究进展
  • 1.2 研究目的、内容和意义
  • 2 实验
  • 2.1 材料
  • 2.2 细胞培养及加药处理
  • 2.3 MTT法测细胞活力
  • 2.4 流式细胞仪测细胞周期和凋亡
  • 2.4.1 检测细胞周期
  • 2.4.2 检测细胞凋亡
  • 2.5 用Hoechest 33258进行核染色
  • 2.6 荧光探针测ROS
  • 2.7 C-GFP Plasmid的转染及激光共聚焦显微镜观察
  • 2.8 Western blot
  • 2.8.1 细胞总蛋白的提取
  • 2.8.2 细胞胞浆蛋白的提取
  • 2.8.3 溶液的配制及实验具体操作方法
  • 2.9 RT-PCR
  • 2.9.1 RT-PCR
  • 2.9.2 溶液的配制及实验具体方法
  • 2.10 统计分析
  • 3.结果与分析
  • 3.1 β-胡萝卜素上调PPARγ基因mRNA和蛋白的表达
  • 3.2 β-胡萝卜素对COX-2,P21和P27基因表达的影响
  • 3.3 β-胡萝卜素对MCF-7细胞的抑制及诱导凋亡
  • 3.4 β-胡萝卜素诱导MCF-7细胞的细胞核形态的变化
  • 3.5 β-胡萝卜素使细胞内活性氧水平上升
  • 3.6 β-胡萝卜素诱导细胞色素C的释放
  • 4 讨论与结论
  • 4.1 讨论
  • 4.1.1 β-胡萝卜素对PPAR-γ,p21和COX-2基因的影响
  • 4.1.2 PPAR-γ、活性氧和细胞凋亡
  • 4.2 结论
  • 参考文献
  • 缩略词表(ABBREVIATIONS)
  • 在读期间发表论文目录
  • 致谢
  • 相关论文文献

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