氧化苦参碱体外抗乙型肝炎病毒作用机制的初步研究

论文摘要

本研究分为二个部分:一、氧化苦参碱与阿德福韦酯体外抑制乙肝病毒复制的比较研究;二、氧化苦参碱体外对乙型肝炎病毒DNA聚合酶活性的影响。一、氧化苦参碱与阿德福韦酯体外抑制乙肝病毒复制的比较研究目的观察氧化苦参碱和阿德福韦酯抑制乙肝病毒复制作用效果。方法将8×104/ml的HepG 2.2.15细胞分别接种于24孔板中,每孔800μl。接种后48小时加入含不同药物浓度的培养液,氧化苦参碱的作用浓度分别为1000μg/ml、500μg/ml和250μg/ml,阿德福韦酯的作用浓度分别为20μg/ml、10μg/ml和5μg/ml,并设立不加药的空白对照组,每组5个复孔。在加药后48小时和96小时收集细胞培养上清,分别对上清中HBV DNA、HBsAg、HBeAg进行定量检测。计算两种药物对HBV DNA、HBsAg、HBeAg的抑制率。结果与空白对照组比较,1000μg/ml的氧化苦参碱和阿德福韦酯20μg/ml对HBV DNA、HBsAg、HBeAg的抑制率最高。加药后48小时1000μg/ml的氧化苦参碱对HBV DNA、HBsAg、HBeAg抑制率分别为24.28%、29.85%、18.48%,20μg/ml阿德福韦酯的抑制率分别为23.80%、34.50%、19.74%;加药后96小时1000μg/ml氧化苦参碱的抑制率分别为29.06%、43.32%、25.13%,20μg/ml阿德福韦酯的抑制率分别为32.98%、47.65%、25.40%。结论氧化苦参碱在体外对乙肝病毒有抑制作用,1000μg/ml的氧化苦参碱与20μg/ml阿德福韦酯对HBV的抑制效果相似。二、氧化苦参碱对乙型肝炎病毒DNA聚合酶活性的影响目的观察氧化苦参碱抑制乙型肝炎病毒DNA聚合酶活性的作用,探讨其抗乙型肝炎病毒作用的可能机制。方法从HepG 2.2.15细胞上清中获取乙型肝炎病毒颗粒,以包括P32-dCTP在内的脱氧核酸作为底物,加入不同药物浓度的反应液,氧化苦参碱的浓度分别为1000μg/ml、800μg/ml、600μg/ml、400μg/ml、200μg/ml,阿德福韦酯的药物浓度分别为100μg/ml、80μg/ml、60μg/ml、40μg/ml、20μg/ml,并设立空白对照组,每组3个复管。于37℃孵育过夜,蛋白酶K消化后每管取35μl点样于DE 81滤膜上,液体闪烁测量仪测量掺入HBV DNA正链中的32P-dCTP的放射量。结果与空白对照组相比,不同浓度的氧化苦参碱作用后,乙型肝炎病毒DNA聚合酶活性维持在103%～107%之间;不同浓度的阿德福韦酯作用后,乙型肝炎病毒DNA聚合酶活性维持在91%～101%之间。各组之间比较无显著差异,P>0.05。结论氧化苦参碱和阿德福韦酯在体外对乙型肝炎病毒DNA聚合酶无直接抑制作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 氧化苦参碱与阿德福韦酯体外抑制乙肝病毒复制的比较研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 氧化苦参碱对乙型肝炎病毒 DNA 聚合酶活性的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 课题小结与进一步工作计划
• 综述 乙型肝炎病毒DNA 聚合酶的功能及活性的检测
• 致谢