论文摘要
壳聚糖膜抑制眼眶损伤后软组织粘连的实验研究目的探讨建立眼眶损伤后出现软组织粘连实验模型的可行性，通过对家兔上直肌及其相对应骨膜的损伤，初步探讨家兔眼眶软组织损伤后粘连形成的机制；观察壳聚糖膜对预防眼眶损伤后软组织粘连的预防作用；通过对实验动物的进行病理学及免疫组织化学的检验，初步探讨壳聚糖预防粘连的形成机制；对实验对象进行视神经的病理学观察和视觉电生理的检查，初步观察壳聚糖对视神经的组织学影响和视功能的影响。方法1．兔眼眶损伤后软组织粘连模型的建立取成年健康家兔12只，分为4组。用盐酸氯胺酮（50mg／kg）和盐酸氯丙嗪（25mg／kg）肌肉注射麻醉后，从上睑穹隆结膜入路，分离软组织，找到上直肌及其对应的骨膜，用圆形手术刀片分别搔刮长度为1cm的上直肌，对相应部位的眶骨膜用同样的方法搔刮，面积为1cm2，两处搔刮的次数各10次，用生理盐水冲洗损伤面后，缝合上直肌及对应的骨膜损伤面。分别于术后3天，7天，14天，30天对搔刮损伤部位粘连情况评分后，空气栓塞法处死各组家兔，对搔刮损伤的部位进行组织病理学检查和TGF-β1免疫组织化学染色观察。2．壳聚糖预防兔眼眶损伤后早期软组织粘连的实验研究取健康成年家兔15只共30只眼，分为三组，分别为A组（生理盐水组）、B组（SHA组）、C（CM膜组）。从上穹隆结膜为入路，分离软组织，找到上直肌核对应的骨膜，在上直肌与对应骨膜间用试验一的方法制造损伤，各组分别用生理盐水冲洗损伤面；透明质酸钠凝胶均匀涂抹损伤面；壳聚糖膜置入损伤面之间后缝合上直肌及对应的骨膜损伤面。术后7天取搔刮损伤的部位进行粘连程度评分；将搔刮损伤区域组织制成切片，经HE染色后观察炎症反应并评分；成纤维细胞计数；对搔刮损伤区域的切片进行TGF-β1免疫组织化学染色。用SPSS12.0对实验结果进行统计分析。对C组所选家兔分别在术前1天及术后6天行F-VEP检查，记录P1波波幅及波潜时，用SPSS12.0对结果进行统计学分析。术后将视神经及其周围组织制成病理切片，观察壳聚糖组兔眼视神经是否存在病理性毒性反应。结果1．兔眼眶软组织粘连模型的建立光镜下，手术区组织表现为炎症反应到纤维斑痕组织的形成过程。术后3天可见炎症细胞浸润；术后7天可见较多的炎症细胞浸润，及大量成纤维细胞增生；术后14天可见炎症反应减轻，纤维组织形成，纤维母细胞数量减少，术后30天可见致密的纤维粘连组织形成。TGF-β1免疫组织化学染色结果为：术后3天TGF-β1染色呈强阳性，术后7天TGF-β1的染色呈强阳性，术后14天TGF-β1染色程度较7天时减弱，术后30天与正常软组织染色一致。2．壳聚糖抑制兔眼眶损伤后早期软组织粘连的实验研究2．1大体观察发现A组的粘连较严重，呈致密的纤维性粘连，而B组和C组的粘连呈松散状。粘连程度分级评分结果（见表1）A组3分有4眼，2分有4眼，1分有2眼；B组3分0眼，2分1眼，1分3眼，0分6眼；C组3分有0眼，2分有0眼，1分有4眼，0分有6眼，统计结果显示C组与A组之间粘连分级有显著差异（P＜0.01）。C组与B组织之间的粘连程度没有显著差异（P＞0.01）。2．2病理学观察结果显示，A组手术区骨膜有渗出，骨膜下和肌纤维之间有大量的纤维组织增生和新生血管，在纤维间可见大量的成纤维细胞，纤维排列致密，其间可见较多的淋巴细胞浸润。炎性纤维组织与骨膜和肌纤维之间粘连紧密，且仅局限于手术区。B组和C组的手术区骨膜反应轻微，骨膜下有轻微的纤维组织增生，其间有少量的纤维母细胞，排列规则，纤维排列疏松，并有少量的淋巴细胞浸润。炎症纤维组织与眼外肌之间无明显的粘连，可见界限比较明显的裂隙。肌纤维表面仅见少量的纤维细胞和肌外膜细胞增生。炎症的评分结果为A组3分有6，2分有4眼，1分有0；0分有0眼；B组3分0眼，2分1眼，1分2眼，0分7眼；C组3分0眼，2分0眼，1分2眼，0分8眼。统计结果显示C组与A组炎症反应的程度的差异有统计学意义（P＜0.01）。C组与B组炎症反应程度差异没有统计学意义（P＞0.01）成纤维母细胞数量统计结果显示：A平均秩次为15.50，B组平均秩次为6.00，C平均秩次为5.50，C组与A组之间差异有统计学意义（P＜0.01）。C组与B组之间差异没有统计学意义（P＞0.01）。2．3 TGF-β1免疫组化结果A组形成的纤维粘连组织及炎症反应区域TGF-β1染色呈强阳性，着色细胞数量多而密集。B组和C组TGF-β1染色呈弱阳性，着色细胞数量少，呈散在分布。术后7天视神经的病理观察视神经切片显示，两组中视神经周围的软组织排列规则，无明显病变；视神经鞘周围无明显纤维组织和炎症细胞浸润；蛛网膜腔隙可见，无明显的细胞增多；视神经纤维走行规则，无明显的变性和胶质细胞增生。术前及术后的VEP结果显示F-VEP的P1波树前合术后两者的波幅值无显著差异。P1波波幅术前平均8.589±1.870mv，术后为9.847±2.320mv，术前术后无显著性差异。（P＞0.01）。结论1．通过损伤上直肌及对应的骨膜，可以建立稳定的粘连模型，术后7天为炎症反应和TGF-β1表达的高峰时期，开始出现成纤维母细胞增生。2．在兔眼眶损伤组织间填充壳聚糖膜可以在损伤后早期有效地减轻炎症反应，抑制粘连TGF-β1的形成。壳聚糖膜术后远期抑制眼眶损伤后软组织粘连的效果尚需进一步实验证实。3．壳聚糖置入眼眶软组织间对视神经的组织结构和视觉电生理结果无明显的影响。