抗Cyclin D1胞内抗体抑制肿瘤生长和转移

论文摘要

肿瘤是严重威胁人类健康的一种疾病，而且由于具有易于扩散和转移等特点，目前尚缺乏有效的治疗手段。Cyclin D1作为细胞进入增殖周期合成的第一个周期蛋白，和CDK4/CDK6形成蛋白复合物，在调控细胞周期G1/S期转换过程中发挥着至关重要的作用。研究发现，在多种恶性肿瘤和癌变组织中，都存在着Cyclin D1的过度表达现象，而且与肿瘤的发生、发展密切相关，所以，Cyclin D1可作为肿瘤治疗的一个重要潜在靶点。研究者们以Cyclin D1为靶点的基因治疗主要集中在反义寡核苷酸、RNA干扰、化学药物治疗等方面。但是这些方法都存在稳定性差、靶向性不强等问题，限制了这些方法在肿瘤治疗中的应用。近年来兴起的胞内抗体技术是以抗体作为效应分子，能够在细胞内高效地、特异地灭活靶蛋白的一种技术，为肿瘤的基因治疗开辟了新的思路。本课题组在先前的工作中，已经把携带内质网滞留型抗人Cyclin D1胞内scFv基因（ER-ADκ）的质粒，成功的转染进MCF-7细胞中，该基因在肿瘤细胞中得到有效表达并实现胞内抗体的目标定位，ER-ADκ的稳定表达能够显著抑制肿瘤细胞的生长和增殖，引起细胞周期阻滞，并明显诱导细胞凋亡。现在有研究证明Cyclin D1与肿瘤的浸润和迁移存在密切的关系，但我们得到的胞内抗体是否影响肿瘤浸润和迁移，及其抗肿瘤机制尚属未知。本研究通过软琼脂集落实验、划痕实验、Transwell实验分析，发现抗CyclinD1胞内抗体ER-ADκ能够显著性降低肿瘤的克隆形成能力、抑制MCF-7细胞的迁移和侵袭；通过Western-blot实验，发现相关周期蛋白、迁移因子等蛋白水平发生了变化，从而为该胞内抗体在肿瘤治疗中的应该提供实验依据。

论文目录

• 内容提要
• 第一章 引言
• 1.1 Cyclin D1 和细胞周期
• 1.1.1 细胞周期
• 1.1.2 细胞周期调控机制
• 1.1.3 Cyclin D1 的发现及结构特点
• 1.1.4 Cyclin D1 与细胞周期调控
• 1.2 Cyclin D1 与肿瘤的发生及转移
• 1.2.1 肿瘤的发生与基因治疗
• 1.2.2 Cyclin D1 与肿瘤的发生
• 1.2.3 Cyclin D1 与肿瘤的转移
• 1.3 胞内抗体
• 1.3.1 胞内抗体概述
• 1.3.2 胞内抗体的作用机制
• 1.4 本研究的立题目的和意义
• 第二章 实验研究
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 细胞株
• 2.1.2 引物设计
• 2.1.3 主要试剂与溶液
• 2.1.4 所用主要仪器
• 2.1.5 计算机辅助工具
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 RT–PCR 实验
• 2.2.2 细胞集落形成实验
• 2.2.3 划痕实验
• 2.2.4 Transwell 体外侵袭实验
• 2.2.5 Western-blot 分析
• 第三章 实验结果
• 3.1 目的基因在稳定转染细胞系中的表达的验证分析
• 3.2 细胞集落形成能力分析
• 3.3 ER-ADκ对 MCF-7 肿瘤细胞迁移的影响
• 3.4 ER-ADκ对 MCF-7 肿瘤细胞体外侵袭的影响
• 3.5 ER-ADκ对 MCF-7 细胞内相关蛋白水平的影响
• 第四章 讨论
• 4.1 抗 CyclinD 1 胞内抗体 ER-ADκ抑制 MCF-7 细胞克隆形成
• 4.2 抗 CyclinD 1 胞内抗体 ER-ADκ抑制 MCF-7 细胞的迁移和浸润
• 第五章 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢