论文摘要
【目的】探讨NF-κB在AngⅡ调控人脐静脉内皮细胞生存／凋亡信号通路中的作用。【方法】体外培养人脐静脉内皮细胞系（HUVEC），实验分为正常对照组、AngⅡ组和Gliotoxin干预组。应用光学显微镜和改良MTT法，观察0.01μmol／L、0.1μmol／L、1μmol／L和10μmol／L 4种浓度的AngⅡ在不同时间（6h、12h、18h和24h）对HUVEC细胞活性和生长率的影响。应用DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测AngⅡ作用于细胞后引起细胞凋亡的情况。应用流式细胞术定量检测AngⅡ引起细胞凋亡的情况。应用免疫细胞化学技术检测NF-κB p65的核移位，评价NF-κB活化情况。应用SPSS 11.5进行统计学分析，数据采用单因素方差分析，随后用q检验进行两两比较，以P＜0.05判定差异具有统计学意义。【结果】①1μmol／L AngⅡ作用于细胞24h时，细胞活性下降，与正常对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）；10μmol／L AngⅡ作用于细胞18h和24h时，细胞活性下降，与正常对照组相比，差异具有统计学意义（P＜0.01）。0.1mg／L Gliotoxin可拮抗AngⅡ对HUVEC细胞活性的抑制作用，与正常对照组相比，差异不具有统计学意义（P＞0.05）。②DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示，10μmol／L AngⅡ作用于细胞24h时，DNA琼脂糖凝胶电泳呈现明显的梯状条带，提示发生凋亡；而正常对照组和Gliotoxin干预组琼脂糖凝胶电泳未见梯状条带，提示未发生明显凋亡；③流式细胞技术证实，10μmol／L AngⅡ作用于细胞24h时，凋亡细胞率明显高于正常对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；而Gliotoxin干预组细胞凋亡率与正常对照组相比，差异不具有统计学意义（P＞0.05）。④免疫细胞化学技术分析显示，在经AngⅡ诱导的HUVEC细胞中，NF-κB出现明显核移位现象，提示NF-κB发生活化，与正常对照组相比，差异具有统计学意义（P＜0.01）；Gliotoxin则明显抑制NF-κB活化，与AngⅡ处理组相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）。【结论】①AngⅡ可引起HUVEC细胞形态学改变，细胞活性降低，细胞凋亡率增高，DNA断裂呈梯状条带，其程度与AngⅡ呈剂量依赖性。②NF-κB特异性抑制剂Gliotoxin能够拮抗AngⅡ对HUVEC细胞抑制活性和促进凋亡作用。③NF-κ3可能是AngⅡ调控HUVEC细胞生存／凋亡通路中的重要信号转导分子。
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标签：血管紧张素论文; 人脐静脉内皮细胞论文; 凋亡论文;