乳黄片对A型肝性脑病大鼠神经递质GABA、Glu表达调控的研究

论文题目: 乳黄片对A型肝性脑病大鼠神经递质GABA、Glu表达调控的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 中医内科学

作者: 魏玮

导师: 张赤志

关键词: 肝性脑病,乳黄片,实验研究,谷氨酸,氨基丁酸,外周型苯二氮卓受体,谷氨酸转运体

文献来源: 湖北中医学院

发表年度: 2005

论文摘要: 目的 大量研究表明在肝性脑病（hepatic encephalopathy,HE）疾病的发展过程中,抑制性神经递质γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyric acid,GABA）、兴奋性神经递质谷氨酸（glutamate,Glu）比例失衡起着重要作用。导师张赤志教授根据“上病下治”、“肝病宜疏通大肠”的中医理论,利用中药酒制大黄和微生态制剂乳酸菌素制成乳黄片治疗HE,临床和动物实验显示其有很好的降氨作用,能明显改善HE症状及相关指标,提高存活率。因此,从神经递质角度探讨该方治疗HE的作用机制,有着非常重要的意义。本实验通过建立A型HE大鼠模型,观察氨、神经递质GABA、Glu及GABAA受体、外周型苯二氮卓受体（peripheral-type benzodiazepine receptor,PTBR）、Glu转运体（GLAST）的变化,阐明氨、神经递质及其相关受体在HE中的作用,探讨乳黄片治疗HE的靶点和可能作用机制,为中医药治疗HE提供科学依据。 方法 1.SPF级雄性Wistar大鼠96只,随机分为6组,每组16只:正常对照组（A组）、模型对照组（B组）、乳果糖组（C组）、乳黄片小中大剂量组（D、E、F组）。大鼠禁食过夜（14h以上）,除A组外其余各组采用目前应用较成熟的硫代乙酰胺（TAA）诱导法(250mg·kg-1体重,0h、24hTAA灌胃造模)复制A型HE动物模型。在TAA首次造模前2h,A、B组灌胃生理盐水10ml·kg-1体重,C、D、E、F组给等量/体重比相应药物。以后每8h重复给药一次。自首次TAA造模至实验结束,每隔8h皮下注射3ml 10%葡萄糖、2ml含等量生理盐水与20μmol·L-1KCl溶液的混合液以防止低血糖。于实验30h后行脑电图（EEG）检测,之后处置动物取材。2.眼眶取血,检测ALT、AST、TBil及TNF-α、内毒素水平、血氨、血GABA。3.取肝脏组织,制作切片,电镜观察超微结构变化。4.小脑延髓池抽取脑脊液,干化学法检测脑氨。5.取大脑皮层组织,高效液相法检测GABA、Glu,免疫组织化学染色法检测GABAA受体表达,逆转录-多聚酶链反应法（RT-PCR）检测PTBRmRNA和Glu转运体GLASTmRNA的表达情况。 结果 1.乳黄片可以显著改善HE大鼠行为异常,提高存活率。2.B组ALT、AST、TBil、脑脊液氨、血氨、TNF-α、内毒素水平均明显高于A组（P<0.01）,且检测到A组检测不出的GABA。C、D、E、F组上述指标亦高于A组。治疗后C、D、E、F组上述指标较B组均有所下降,且D、E、F组均优于C组,其中,以E组湖北中医学院博士学位论文下降值最多。3。电镜观察,B组大鼠肝细胞有不同程度的坏死、崩解及消失,未坏死细胞也有严重变性,坏死组织中有较多的炎性细胞及脂滴浸润。与B组相比,C、D、E、F组肝细胞损伤程度和损伤面积均有改善,而以E组改善最明显。4。与A组比较,B组GABA升高,Glu下降明显,二者比值亦有所下降,均有统计学意义（P<0。01）。其余四组GABA均较B组有不同程度的下降,Glu及其与GABA的比值均增加,有显著性差异（P<0 .01）,且以E组效果最佳。5。B组大鼠GABA;阳性细胞平均数（N）及平均光密度（D）显著高于A组(P（0.01）。C、D、E、F组均较之明显下降（P<0。01）,而以E组下降最显著。6.B组PTB而RNA表达上升,治疗后C、E、F组较B组均有不同程度的下降（P<0 .05）;B组GLASTmRNA表达下降,治疗后C、E、F组表达均较之升高（P<0 .05）。均以E组效果最佳（P<0 .05）。结论高氨是A型肝性脑病发病的病理基础之一,其对神经递质GABA、Glu的影响在HE的发病机理中占有重要作用。实验发现HE时,脑氨、血氨及其比值显著升高。同时,血清内检测出正常情况下检测不到的GABA,并伴有皮层组织GABA增加以及GABA;受体高表达,PTBIhaRNA表达上调,证实了GABA/BZ假说;另外,还发现兴奋的神经递质Glu及其转运体GLASTmRNA表达下调。因此,综合看来,氨引起神经递质功能紊乱可能是A型HE发病机理之一;HE时,GABA和Glu功能失衡,导致抑制性神经递质净增,且二者的含量变化与氨有关:而乳黄片可通过多个环节改善A型HE大鼠的GABA/Glu失衡,对抗HE,提示该方的作用靶点不仅在降氨,而且可改善神经递质失衡。关键词 肝性脑病/A型@乳黄片实验研究氨谷氨酸丫一氨基丁酸外周型苯二氮卓受体谷氨酸转运体

论文目录:

中文摘要

英文摘要

英文缩略词表

前言

实验一 乳黄片对A型HE大鼠肝功能与肝组织超微结构及脑电图的影响

实验二 乳黄片对A型HE大鼠血清内毒素和TNF-α的影响

实验三 乳黄片对A型HE大鼠血氨、脑氨的影响

实验四 乳黄片对A型HE大鼠血清GABA、大脑皮层GABA、Glu的影响

实验五 乳黄片对A型HE大鼠大脑皮层GABAA受体的影响

实验六 乳黄片对A型HE大鼠大脑皮层PTBR和GLAST表达的影响

讨论与结语

文献综述1 氨、GABA、GLU与肝性脑病

文献综述2 肝性脑病中医药研究概况

在校期间发表论文情况

致谢

发布时间: 2005-06-22

参考文献

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