GPX3基因与胰腺癌化疗耐药相关性的实验研究

论文摘要

肿瘤细胞对化疗药物的耐受现象是影响胰腺癌化疗效果的重要因素之一。近年来的研究发现，活性氧族（reactive oxygen species，ROS）可能在肿瘤耐药中发挥着重要作用。ROS是具有很高活性的氧代谢物，包括H2O2、超氧化自由基(02-·)和羟基自由基（OH·）等多种物质。高浓度的ROS具有细胞毒性作用。细胞内的ROS是否利于肿瘤产生耐药还存有争议。哺乳动物的细胞中，主要存在三种类型的抗氧化酶：超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（catalase）和过氧化物酶（peroxidase），它们具有清除细胞内ROS的作用。谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽（GSH）还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用，有力地减少抗癌药物的损害。谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）几乎在所有组织中都有分布，它有多种亚型，其中GPX3是细胞外型。本实验室在前期的研究工作中通过基因芯片技术发现，GPX3基因的表达水平可能与胰腺癌细胞的耐药性密切相关。目前国内外文献尚未见GPX3对胰腺癌细胞化疗耐药性的影响的相关报道。本研究中，我们采用实时荧光半定量RT-PCR、Western blot等方法检测GPX3基因在人胰腺癌细胞株中的表达情况，以验证前期基因芯片检测结果。结果发现：在人胰腺癌细胞株SW1990及其三株耐药株SW1990／FU、SW1990／ADM、SW1990／GEM中，GPX3在mRNA水平均较亲本株有不同程度的升高，分别为亲本株的1.81、2.51、3.43倍；在蛋白水平分别为0.94、1.78、2.58倍。在进一步的实验中，我们通过RNAi技术下调胰腺癌细胞GPX3基因表达，观察GPX3在转录、翻译水平的改变对人胰腺癌细胞株耐药性的影响。结果发现：采用RNA干扰技术抑制胰腺癌细胞GPX3基因表达后，各细胞株GPX3在mRNA水平和蛋白水平均较前降低，细胞对不同化疗药物的敏感性均增加，IC50减低。以上实验结果表明，GPX3基因的表达水平与胰腺癌细胞的耐药性相关。另外本实验结果也说明，作为一种分泌型蛋白，GPX3在人胰腺癌细胞亦有表达。

论文目录

• 1. 英文缩略词表
• 2. 中文摘要
• 3. 英文摘要
• 4. 前言
• 5. 第一部分 人胰腺癌细胞株GPX3基因的表达
• 5.1 材料与方法
• 5.2 结果
• 5.3 讨论
• 6. 第二部分抑制GPX3基因表达后人胰腺癌细胞株耐药性的改变
• 6.1 材料与方法
• 6.2 结果
• 6.3 讨论
• 7. 结论
• 8. 参考文献
• 9. 文献综述
• 10. 致谢