天然红曲色素标准品的研制

论文摘要

红曲色素作为微生物发酵生产的天然色素产物,具有无毒副作用、耐高温、优良的药用价值等优点,被广泛应用于食品着色和医药成分。至今,国内无红曲色素标准品的纯化工艺研究,国际上亦无统一认可的标准品,导致诸多研究受到了限制。本论文针对酯溶性红曲色素标准品的提取、分离纯化、分析测试和稳定性进行研究。1.提取：利用索氏提取法研究了正己烷、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷四种不同溶剂对酯溶性红曲色素的提取率效果,得到了正己烷-乙酸乙酯（1+1）的混合溶液为最佳的提取溶剂。2.分离纯化：利用正相柱层析和反相制备液相色谱对酯溶性红曲色素进行分离纯化,优化红曲标准品研制的工艺流程。以220mm（L）×25mm（i.d）的玻璃层析柱湿法装填充Silicycle硅胶60,正己烷上样、9：1正己烷：乙酸乙酯淋洗、5：1洗脱橙色组分,然后用制备型液相色谱以OBDTM-Prep C18柱（150mm×19mm×5μm）,梯度洗脱（0-10min,60%-25%水；20～21min,25%-5%水；25-30min,0%-60%水）,流速为10ml/min,进样体积2000μl,进行分离纯化。将分离组分以正已烷重结晶,得到了质量数为382的红曲红素和质量数为354的红斑素两种标准品,得率分别为0.037%、0.067%。该制备工艺得率稳定、重现性良好。3.分析检测：采用液质联用检测两种色素的一级质谱图并分析数据纯度、通过1H核磁共振检测数据分析并与文献数据对比确定物质结构、分光光度法检测两种橙色素在300～500nm有吸收峰,最大波长为382nm、超高效液相色谱以XBridge TMC18柱（4.6 mm×150 mm×5μm）,70%甲醇水等度淋洗,波长设置为最大吸收波长382nm,利用峰面积归一化法计算出红曲标准品的纯度为100%,同时又设置了370nm、354n、.320nm、410nm、465nm的检测波长检测五份样品,未发现其他杂质峰。实验研究出一套红曲色素标准品的质谱、紫外、核磁共振、全波长的分析谱图和检测方法。4.稳定性研究：避光措施下贮存30天,红曲红素和红斑素含量变化不变,自然光照下,红斑素稳定性不好。实验还研究了在棕色玻璃瓶避光、锡箔纸避光、单波长紫外光照射、自然光照射的红曲红素吸光度变化情况,试验结果表明,可见光比单波长的紫外光分解速度快,棕色玻璃避光效果要好于锡箔纸的避光效果,初步确定贮存条件。长期稳定性还有待进一步研究。本研究确立了红曲色素标准品的研制工艺,提供了红曲色素标准品纯化方法,并进行了稳定性试验。为红曲标准品的研制提供科学数据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 第一章 绪论
• 1.1 红曲色素概述
• 1.2 红曲色素单体表现的不同活性
• 1.2.1 酯溶性红曲黄色素
• 1.2.2 酯溶性红曲橙色素
• 1.2.3 酯溶性红曲红色素
• 1.3 红曲色素的研究现状
• 1.3.1 红曲单一色素形成机理和结构
• 1.3.2 分离纯化的研究方法
• 1.4 研究意义
• 1.5 研究思路及内容
• 第二章 红曲色素纯化工艺及制备
• 2.1 实验仪器与试剂
• 2.2 分离与检测条件
• 2.3 实验方法的探究
• 2.3.1 提取方法的优化
• 2.3.2 溶剂的选择
• 2.3.3 流动相梯度的优化
• 2.3.4 PHPLC色谱条件的优化
• 2.3.5 柱层析分离红曲色素条件的探究
• 2.4 实验具体步骤
• 2.5 实验结果
• 2.5.1 索氏提取色素组分的检测结果
• 2.5.2 柱层析分离橙色组分的检测结果
• 2.5.3 红斑素和红曲红素的检测结果
• 2.6 小结
• 第三章 纯度和产率测定
• 3.1 超高效液相色谱检测红曲色素
• 3.1.1 实验仪器、试剂
• 3.1.2 样品制备
• 3.1.3 色谱条件
• 3.1.4 全波长检测
• 3.1.5 两种橙色素纯度检测结果
• 3.2 液质联用检测红曲色素
• 3.2.1 LCMS参数设置
• 3.2.2 质谱检测结果分析
• 3.3 核磁共振检测结果
• 1 红斑素（Rubropunctamine ）'>3.3.1 O₁ 红斑素（Rubropunctamine ）
• 2红曲註素（Monascombine）'>3.3.2 O₂红曲註素（Monascombine）
• 3.4 样品收率试验
• 3.5 小结
• 第四章 红曲色素标准品稳定性的研究
• 4.1 实验部分
• 4.1.1 实验仪器和试剂
• 4.1.2 样品配置
• 4.1.3 紫外波长的选择
• 4.2 实验结果与分析
• 4.2.1 两种橙色素长期稳定性研究
• 4.2.2 橙色素短期稳定性研究
• 4.2.3 不同保存条件下橙色素稳定性对比研究
• 4.3 小结
• 总结与展望
• 1 结论
• 2 展望
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 硕士期间已发表的学术论文
• 附件