雷帕霉素对小鼠记忆T细胞的体外作用

论文摘要

第一部分建立小鼠皮肤移植排斥模型稳定获得记忆T细胞目的:建立一种稳定的通过小鼠皮肤移植获得小鼠记忆T细胞的方法,为研究药物对小鼠记忆T细胞的体外作用做准备。方法:以C57BL/6小鼠为受者、DBA╱2小鼠为供者行皮肤移植;同时行C57BL/6小鼠行同种同系皮肤移植做对照。术后1-8周,每周取小鼠脾脏,使用流式细胞仪检测所有受体鼠脾单个核细胞悬液中记忆T细胞的比例（n=6）。结果:（1）同种异系皮肤移植组:术后第4周的C57BL/6小鼠脾单个核细胞悬液中记忆T细胞的比例较术后1-3周显著增多（P＜0.01）;术后5-8周的记忆T细胞比例较术后第4周显著增多（P＜0.01）;术后1-3周小鼠记忆T细胞比例无差异（P＞0.05）;术后5-8周小鼠记忆T细胞比例无差异（P＞0.05）。（2）同种同系皮肤移植组:术后8周,每周产生的记忆T细胞比例无差异（P＞0.05）。结论:接受同种异系皮肤抗原刺激4-5周后,小鼠记忆T细胞发生稳态增殖,此模型可以稳定的获得小鼠记忆T细胞。第二部分雷帕霉素对小鼠记忆T细胞的体外作用目的:探讨雷帕霉素对小鼠记忆T细胞的体外生长及白介素-2（IL-2）表达的影响,比较其与初始T细胞对雷帕霉素的敏感性差异,并且初步探讨雷帕霉素对小鼠记忆T细胞抑制作用的机制。方法:取6周龄以下的C57BL/6小鼠脾脏制备成脾单个核细胞,使用免疫磁珠法分选出小鼠初始T淋巴细胞;取第一部分实验中经过同种异系皮肤移植存活6周以上的C57BL/6小鼠,荧光激活细胞分类术（FACS fluorescence-activated cell sorting）分选出小鼠记忆T细胞。将分选出的小鼠初始和记忆T细胞分别加入0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml梯度浓度的雷帕霉素培养液培养72h后,采用MTT法及Elisa法测定各组细胞的生长情况及IL-2表达情况。同样于72小时后测定10ng/ml雷帕霉素浓度组及对照组（0ng/ml）小鼠记忆T细胞细胞周期的变化,并且使用RT-PCR检测其IL-2R（α、β、γ亚基）mRNA表达情况。结果:用雷帕霉素培养液培养细胞时,小鼠初始和记忆T细胞生长及IL-2的表达均受到抑制（P＜0.01）;随药物浓度增加,细胞生长及IL-2表达受抑制越明显（P＜0.01）;同浓度雷帕霉素对于记忆T细胞的生长及IL-2的表达的抑制程度均较初始T细胞弱（P＜0.01）;细胞周期检测结果示,实验组与对照组相比,G0G1期细胞的比例升高（P＜0.01）,S期降低（P＜0.01）。RT-PCR结果显示实验组与对照组IL-2R（α、β、γ亚基）mRNA的表达均有显著性差异（P＜0.01）。结论:在体外雷帕霉素对小鼠初始和记忆T细胞的生长、IL-2的表达起抑制作用,且随浓度增加,抑制作用增强;且雷帕霉素对小鼠记忆T细胞的抑制作用程度较初始T细胞弱。雷帕霉素通过抑制小鼠记忆T细胞的IL-2R（α、β、γ亚基）及IL-2的表达,并且阻滞其细胞周期来抑制其生长。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 正文
• 第一部分 建立小鼠皮肤移植排斥模型稳定获得记忆T细胞
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 分析与讨论
• 第二部分 雷帕霉素对小鼠记忆T细胞的体外作用
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 分析与讨论
• 论文小结
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述及参考文献