钩藤碱降低内毒素血症小鼠死亡率的机制研究

论文摘要

目的本研究旨在观察钩藤碱对内毒素血症小鼠死亡率及器宫损伤的影响,并探讨其作用机制,为脓毒症及内毒素血症的防治提供新的策略。方法实验分五部分进行:第一部分:观察钩藤碱对内毒素血症小鼠死亡率的影响。小鼠随机分为四组:对照（Control）组,药物溶剂（Vehicle）组,LPS组和钩藤碱（Rhy）防治组。预先以生理盐水（NS）、Vehicle及不同剂量Rhy以不同给药方式对小鼠进行预防性给药,1次/d,连续3 d;第3 d给药后1h,腹腔注射LPS（BALB/c小鼠20 mg/kg,昆明小鼠28 mg/kg,0.2 ml/10g）。腹腔注射LPS后,每12 h观察各组小鼠死亡率,连续观察6 d。第二部分:观察钩藤碱对内毒素血症小鼠肺、肝、肾、小肠组织结构和及肝、肾功能的影响。小鼠随机分为四组:对照组,LPS组,Rhy防治组和Rhy组。腹腔注射LPS或NS后12 h,收集血清,测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）的水平;并留取小鼠肺、肝、肾、脾及小肠标本,制备石蜡切片,HE染色,在光学显微镜下观察钩藤碱对内毒素血症小鼠以上器官组织结构的影响;留取右肺测定肺湿/干重比值（W/D）。第三部分:观察钩藤碱对内毒素血症小鼠心功能的影响。小鼠随机分为四组:对照组,LPS组,Rhy防治组和Rhy组。腹腔注射LPS或NS后12 h,以VisualSonics?Vevo770?高分辨小动物超声系统对小鼠左心室舒张、收缩功能及形态指标进行测定。第四部分:观察钩藤碱对内毒素血症小鼠血清和心肌组织中细胞因子含量的影响。小鼠随机分为四组:对照组,LPS组,Rhy防治组和Rhy组。腹腔注射LPS或NS后2 h,收集小鼠血清和心肌组织匀浆,用酶联免疫吸附分析（ELISA）方法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-10（IL-10）的水平及心肌组织匀浆中TNF-α和IL-1β的水平;另外分批实验,在腹腔注射LPS后8 h,收集小鼠血清和心肌组织匀浆,以硝酸还原酶法测定小鼠血清和心肌组织匀浆中一氧化氮（NO）的水平。第五部分:观察钩藤碱对脓毒症小鼠死亡率的影响。小鼠随机分成:假手术组、模型组、Rhy治疗组。除假手术组以外,对脓毒症模型组和Rhy治疗组小鼠施行盲肠结扎穿孔术（CLP）,复制脓毒症小鼠模型。术后1h,分别予以Vehicle或不同剂量Rhy皮下注射,1次/12h,连续4次。术后每12h观察各组小鼠生存率一次,连续观察10 d。结果1事先给予皮下注射Rhy能降低内毒素血症BALB/c小鼠的死亡率,8 mg/kg和16mg/kg剂量早期效果较好,LPS注射后24 h小鼠死亡率（54.6%）明显低于LPS组（90.9%）。事先给予皮下注射Rhy 16mg/kg同样能降低内毒素血症昆明小鼠的死亡率,LPS注射后24h小鼠死亡率（43%）明显低于LPS组（81%）。2 LPS腹腔注射后12 h,小鼠血清ALT、AST、Cr、BUN水平和W/D比值显著高于对照组,而Rhy防治组与LPS组比较,上述指标未见显著性差异;Rhy不能减轻内毒素血症昆明小鼠肺、肝、肾和小肠的组织损伤。3钩藤碱能能改善内毒素血症小鼠心功能障碍,减轻内毒素诱导的昆明小鼠心肌收缩功能障碍。4钩藤碱防治组血清中TNF-α水平明显低于LPS组（P＜0.01）,IL-1β、IL-10及NO的水平与LPS组比较无显著差异,钩藤碱防治组心肌匀浆中TNF-α和IL-1β水平明显低于LPS组（P＜0.01）,NO的水平与LPS组比较无显著性差异。5钩藤碱不能降低脓毒症小鼠死亡率。结论钩藤碱能降低内毒素血症小鼠的死亡率,减轻LPS引起的心功能障碍,其作用机制可能与其降低致炎介质TNF-α和IL-1β水平有关,但钩藤碱并不能降低脓毒症小鼠的死亡率。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 前言
• 1 内毒素血症及MODS的发病机制
• 2 抗内毒素血症治疗的进展及存在的问题
• 3 钩藤碱的药理作用
• 4 本研究目的
• 第一部分 钩藤碱对内毒素血症小鼠死亡率的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 第二部分 钩藤碱对内毒素血症小鼠器官组织结构和功能的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 第三部分 钩藤碱对内毒素血症小鼠心功能的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 第四部分 钩藤碱对内毒素血症小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-10和NO水平及心肌组织TNF-α、IL-1β、NO水平的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 第五部分 钩藤碱对脓毒症小鼠死亡率的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 缩略词表
• 在读期间发表论文
• 致谢