论文摘要
[目的]碘离子可以致内皮细胞等多种细胞增殖和凋亡,而经典的碘离子通道就是分布在甲状腺上的钠-碘同向转运体（NIS）,NIS主要在甲状腺及神经组织等腺外组织表达,而内皮细胞上是否也有NIS表达至今未见报导。但是,内皮细胞上却有氯离子通道-3（CLC3）的表达,并且CLC3在通常情况下对碘离子的选择性大于氯离子。由此,本实验通过体外培养脐静脉内皮细胞,运用RT-PCR、Western Blot、流式细胞术等方法研究CLC3通道在不同碘离子浓度及时相促进脐静脉内皮细胞增殖和凋亡中的作用,探讨碘离子是否经过CLC3进入内皮细胞,丰富碘离子通道的研究。[方法]1.细胞株：人脐静脉内皮（HUVEC）细胞株,购于南京凯基生物有限公司2.实验分组：KI3.流式细胞术：用不同浓度的碘离子培养液处理脐静脉内皮细胞24小时和48小时后,经离心—PBS冲洗—吹匀—固定—再离心—冲洗—吹打—染色（4℃,20～30分钟）后,再用400目尼龙网将之过滤之后上机检测。用ModFit分析软件分析,细胞相对增殖活力用细胞分裂增殖指数表示。4.钠碘同向转运体（NIS） mRNA的RT-PCR:将脐静脉内皮细胞培养于含不同浓度的碘离子培养液中24小时和48小时后,提取细胞的总RNA,经反转录—扩增—电泳,检测钠碘同向转运体（NIS） mRNA的表达。5.钠碘同向转运体（NIS）蛋白Western Blot:用不同浓度的碘离子培养液培养脐静脉内皮细胞24小时和48小时后,提取总蛋白,经电泳—转膜—封闭—孵育一抗—孵育二抗—显色等过程,检测目的蛋白NIS的表达。6.氯离子通道（CLC3） mRNA的RT-PCR:将脐静脉内皮细胞用含不同浓度的碘离子培养液处理24小时和48小时后,提取其总RNA,再经反转录—扩增—电泳等步骤,检测氯离子通道（CLC3） mRNA的表达。7.氯离子通道（CLCN3）蛋白的Western Blot:搜集含不同浓度碘离子培养液处理24小时和48小时后的脐静脉内皮细胞,先用蛋白裂解液提取总蛋白,再经电泳—转膜—封闭—孵育—抗—孵育二抗—显色,检测目的蛋白CLCN3的表达。[结果]1.流式细胞术：24小时,碘离子浓度为100μg/L～5000μg/L实验组细胞增殖指数明显高于对照组,而细胞凋亡率明显低于对照组；碘离子浓度为7000μg/L的实验组细胞增殖指数与对照组比较没有明显差别,而细胞凋亡率明显高于对照组；碘离子浓度≥9000μg/L的实验组细胞增殖指数明显低于对照组,而细胞凋亡率高于对照组。48小时,碘离子浓度为100μg/L-3000μg/L实验组细胞增殖指数明显高于对照组,同时细胞凋亡率明显低于对照组；碘离子浓度为5000μg/L的实验组细胞增殖指数跟对照组比较没有差别,而细胞凋亡率高于对照组；碘离子浓度≥7000μg/L的实验组细胞增殖指数低于对照组,同时细胞凋亡率明显高于对照组。2.钠碘同向转运体（NIS） mRNART-PCR:钠碘同向转运体（NIS） mRNA在HUVEC表达缺失。3.钠碘同向转运体（NIS）蛋白western:钠碘同向转运体（NIS）蛋白在HUVEC表达缺失。4.氯离子通道（CLC3）mRNA RT-PCR:与对照组相比,24h时1000μg/L-5000μg/L实验组,和48h时100μg/L实验组CLC3的mRNA表达上调,P<0.05,差异有统计学意义；7000μg/L实验组（24h）和5000μg/L实验组（48h）CLC3的mRNA表达差异无统计学意义,P>0.05；9000μg/L实验组在24h时及7000μg/L-9000μg/L实验组在48h时CLC3的mRNA表达下调,P<0.05,差异有统计学意义。5.氯离子通道（CLCN3）蛋白western blot:与对照组相比,1000～5000μg/L实验组（24h）及1000μg/L实验组（48h）在细胞CLCN3蛋白表达增强,P<0.05,差异有统计学意义；而7000μg/L实验组（24h）及5000μg/L实验组（48h）CLCN3蛋白表达与对照组没有差别,无统计学意义,P>0.05；9000μg/L实验组（24h）及7000μg/L-9000μg/L（48h）CLCN3蛋白表达减弱,P<0.05,差异有统计学意义。[结论]1.碘离子对脐静脉内皮细胞增殖活性具有促进和抑制两方面的作用,其作用效果与作用时间和作用浓度密切相关,即适宜浓度的碘离子对脐静脉内皮细胞增殖活性存在时间-剂量-效应关系。2.人脐静脉内皮细胞上钠碘转运体（NIS）表达缺失。3.人脐静脉内皮细胞上氯离子通道-3（CLC3）表达阳性,碘离子可以通过CLC3进入到脐静脉内皮细胞内,从而促进内皮细胞的增殖和凋亡。
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