论文题目: 抑制性差减杂交结合cDNA芯片筛选家兔高脂血症及动脉粥样硬化相关基因
论文类型: 博士论文
论文专业: 病理生理学
作者: 李晓宇
导师: 陈琪,范乐明
关键词: 动脉粥样硬化,高脂血症,高胆固醇血症,基因,芯片,表达文库,蛋白,热休克蛋白
文献来源: 南京医科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:探寻与AS发生发展相关的调节脂质代谢、氨基酸代谢、糖代谢、炎症反应、免疫应答、变态反应等的肝脏差异表达基因,明确肝脏在高脂血症和AS发生中的作用。 方法:通过给新西兰白兔喂饲高胆固醇饮食复制高脂血症-As动物模型。根据其血清胆固醇含量分为敏感组和不敏感组。分别取两组动物的肝脏,抽提总RNA,并分离mRNA,以造型敏感组为受检者（tester）、造型不敏感组为驱动者（driver）,进行正向SSH;在反向SSH中则相反。经两轮杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接构建cDNA差减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增。 随机挑取800个阳性克隆,以插入片段两侧载体序列PinPoint和Sp6为引物PCR扩增,PCR产物经浓缩、变性处理,点于尼龙膜上,制成cDNA芯片。提取造型敏感组和不敏感组兔肝mRNA,反转录后经同位素33P标记,分别与两张相同的芯片杂交,获取量化的杂交信号。 将差异表达克隆测序,所得结果通过Blastn软件与GenBank中的已知核苷酸序列进行查询和同源比较。选取6条基因,通过荧光半定
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 高脂血症兔肝抑制性差减文库的构建和鉴定
第二部分 cDNA芯片结合荧光定量PCR鉴定差减克隆
第三部分 家兔新基因的克隆、分析
第四部分 热休克蛋白70与AS发生的相关性研究
小结
参考文献
缩略语
致谢
附录
综述
发布时间: 2005-07-22
参考文献
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