谷氨酰胺联合5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、表阿霉素、草酸铂对胃癌细胞株MGC-803的抑制作用、药物间相互作用及其机制研究

论文摘要

研究目的：研究胃癌化疗药物5-氟尿嘧啶（5-Fu）、丝裂霉素C（MMC）、表阿霉素（EPI）、草酸铂（L-OHP）与谷氨酰胺（GLN）间的相互作用及其机制，阐明药物间关系，为选择合理胃癌治疗方案提供依据。研究方法：采用MTT法检测药物对细胞抑制作用的时效及量效关系，应用Chou—Talalay联合指数法（即中效原理）判定两药合用相互作用关系；应用流式细胞仪检测药物对细胞周期分布的影响；透射电镜观测药物作用后细胞超微结构的改变及药物作用的结构靶点；AnnexinⅤ／PI双染流式细胞术、Hoechst 33258染色荧光显微术观察药物作用后细胞调亡情况；Westem blot法检测GLN、化疗药物对于影响化疗效果的靶蛋白表达的影响。实验结果：1．GLN无明显的刺激肿瘤生长的作用；GLN主要表现为肿瘤生长抑制作用，此作用呈时间、剂量依赖性；2．MMC的抗肿瘤活性主要表现为时间依赖性，联合应用GLN，呈较弱的拮抗作用（1.01＜CI＜1.29）；MMC有明显的S期阻滞作用，导致细胞增殖指数（PI）增高；GLN可以降低由MMC引起的PI值增高，尤其是大剂量合用时效果显著。GLN可以加重MMC引起的细胞超微结构损伤，并加重凋亡。GLN可以通过下调由MMC上调的NF-κB表达、下调VEGF的表达，来增强化疗敏感性、逆转化疗耐药性；3．5-Fu的抗肿瘤活性主要表现为时间依赖性，故小剂量持续给药较为合理；联合应用GLN，小剂量联合时呈拮抗作用，大剂量联合时呈协同作用；5-Fu对细胞周期及细胞增值指数（PI）影响较小；合用GLN后，不改变周期及PI值。GLN可以加重5-Fu引起的细胞超微结构损伤，并加重坏死。GLN可以通过下调由5-Fu上调的NF-κB表达、联合下调VEGF的表达，来增强化疗敏感性、逆转化疗耐药性；4．EPI具有良好的抗肿瘤活性，呈时间及剂量依赖性，联合应用GLN，小剂量联合时呈协同作用，大剂量联合时呈拮抗作用；EPI不同浓度、不同作用时间可表现为G2／M期阻滞和S期阻滞，PI值增高；合用GLN后，可以减低PI值，尤其是大剂量合用时作用显著；GLN可以加重EPI引起的细胞超微结构损伤，并加重凋亡发生。GLN通过下调由EPI上调的Bcl-2、NF-κB表达、联合下调VEGF的表达，来加重凋亡、增强化疗敏感性、逆转化疗耐药性；5．L-OHP的抗肿瘤活性呈时间及剂量依赖性；联合应用GLN，小剂量联合时呈协同作用，大剂量联合时呈较强的拮抗作用；小剂量L-OHP引起轻度S期阻滞和G2／M期阻滞，中等剂量引起明显的S期阻滞作用，大剂量无明显周期阻滞现象；中、低剂量L-OHP可显著提高PI值，而大剂量时无此作用；合用GLN对细胞周期、PI值无明显影响；GLN可以加重EPI引起的细胞超微结构损伤，并加重凋亡发生。GLN通下调由L-OHP上调的Bcl-2、NF-κB表达、联合下调VEGF的表达，来加重凋亡、增强化疗敏感性、逆转化疗耐药性；研究结论：1．GLN无明确刺激肿瘤细胞生长的作用，GLN用于肿瘤病人是安全的；2．使用MMC时，可以考虑同时使用GLN，以增强MMC细胞杀伤效果、减低细胞增值指数；3．较大剂量5-Fu与GLN同时应用时药效协同，同时GLN可以加重肿瘤细胞的损伤，并降低VEGF表达，有利于肿瘤治疗；4．较大剂量EPI与GLN合用时药效协同，同时GLN可增加凋亡的发生、降低细胞增值指数、加重肿瘤细胞的损伤；5．L-OHP与GLN合用时，剂量不应过大，此时药效协同；同时GLN可以增加凋亡的发生、加重肿瘤细胞的损伤、降低VEGF表达，有利于肿瘤治疗；2．四种化疗药物均可以上调NF-κB表达，GLN可逆转NF-κB的上调，从而增强化疗敏感性、逆转化疗耐药性；

论文目录

• 中英文名词及缩写对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 论文正文
• 第一部分 谷氨酰胺联合5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、表阿霉素、草酸铂对胃癌细胞株MGC-803的抑制作用及药物间相互作用
• 材料和方法
• 结果
• 1.1 MGC-803细胞的生长曲线
• 1.2 GLN联合5-Fu、MMC、EPI、L-OHP对MGC-803细胞的时效及量效关系
• 1.2.1 GLN单用对于细胞生长的影响
• 1.2.2 MMC单用及联合GLN对于细胞的抑制作用
• 1.2.3 5-Fu单用及联合GLN对于细胞的抑制作用
• 1.2.4 EPI单用及联合GLN对于细胞的抑制作用
• 1.2.5 L-OHP单用及联合GLN对于细胞的抑制作用
• 讨论
• 小结1
• 参考文献
• 第二部分 谷氨酰胺联合5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、表阿霉素、草酸铂对胃癌细胞株MGC-803作用的机制研究——是否通过影响细胞周期分布、改变细胞超微结构、调节凋亡、以及影响Bcl-2、NF-κB、VEGF表达来发挥GLN与化疗药物间相互作用
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 2.1 MMC联合GLN对胃癌细胞株MGC-803作用的机制研究
• 2.1.1 药物浓度的选择
• 2.1.2 MMC单用及联合GLN对与细胞周期分布和细胞增殖指数（PI）的影响
• 2.1.3 MMC单用及联合GLN对于细胞细胞凋亡的影响
• 2.1.4 MMC单用及联合GLN对于细胞细胞凋亡的影响
• 2.1.5 MMC单用及联合GLN对于Bcl-2、VEGF、NF-κB表达的影响
• 2.2 CLN联合5-Fu对胃癌细胞株MGC-830作用的机制研究
• 2.2.1 药物浓度的选择
• 2.2.2 5-Fu单用及联合GLN对与细胞周期分布和细胞增殖指数（PI）的影响
• 2.2.3 5-Fu单用及联合GLN对细胞超微结构的影响
• 2.2.4 5-Fu单用及联合GLN对于细胞细胞凋亡的影响
• 2.2.5 5-Fu单用及联合GLN对于Bcl-2、VEGF、NF-κB表达的影响
• 2.3 EPI联合EPI对胃癌细胞株MGC-803作用的机制研究
• 2.3.1 药物浓度的选择
• 2.3.2 EPI单用及联合GLN对与细胞周期分布和细胞增殖指数（PI）的影响
• 2.3.3 EPI单用及联合GLN对细胞超微结构的影响
• 2.3.4 EPI单用及联合GLN对于细胞细胞凋亡的影响
• 2.3.5 EPI单用及联合GLN对于Bcl-2、VEGF、NF-κB表达的影响
• 2.4 L-OHP联合MMC对胃癌细胞株MGC-803作用的机制研究
• 2.4.1 药物浓度的选择
• 2.4.2 L-OHP单用及联合GLN对与细胞周期分布和细胞增殖指数（PI）的影响
• 2.4.3 L-OHP单用及联合GLN对细胞超微结构的影响
• 2.4.4 L-OHP单用及联合GLN对于细胞细胞凋亡的影响
• 2.4.5 L-OHP单用及联合GLN对于Bcl-2、VEGF、NF-κB表达的影响
• 讨论
• 小结2
• 参考文献
• 文献综述 谷氨酰胺（GLN）在肿瘤治疗中的应用
• 致谢
• 个人简历