仙味保金方治疗过敏性支气管哮喘的代谢组学研究

论文摘要

目的：在建立家兔过敏性支气管哮喘模型的基础上,通过动物实验,引入代谢组学,确定与过敏性支气管哮喘相关联的有意义代谢产物,完善仙味保金方治疗过敏性支气管哮喘机理的研究方法,探索过敏性支气管哮喘动物模型代谢物组变化研究的新模式。方法：将家兔适应性饲养7天无异常后,模型组家兔和仙味保金方组家兔予10%卵蛋白（OVA）生理盐水溶液腹腔注射,剂量为1.2ml/kg,对照组家兔予等剂量生理盐水腹腔注射。每只家兔均注射一次。14天后,对模型组、仙味保金方组家兔用1%0VA生理盐水溶液雾化激发；对照组用生理盐水雾化激发。连续雾化7日,每日一次,每次反复操作直至家兔出现腹肌抽搐、烦躁、唇鼻紫绀、二便失禁等表现。雾化激发结束后第四天进行灌胃治疗,考虑到中药复方药效缓和但药效持久的特点,共给药3天。根据人与动物体表面积换算公式计算得到每只家兔每日的灌胃量为：0.35g药粉。具体灌胃操作如下：第一步：先将0.35g药粉用温开水溶解定容至20ml药液,每只家兔20ml药液。第二步：将家兔固定于兔盒内,经灌胃管注入20ml药液。（对照组与模型组家兔则以同样方法注入等剂量生理盐水。）雾化激发结束后采取家兔耳缘静脉血、支气管肺泡灌洗液标本,用于嗜酸性粒细胞计数检测；灌胃治疗结束后采取家兔耳缘静脉血、支气管肺泡灌洗液和尿液标本,用于代谢组学检测。嗜酸性粒细胞计数统计分析应用SASV8软件,经方差齐性检验及正态性检验后,采用wilcoxon秩和检验,计量资料采用x±s表示；代谢产物统计分析采用单因素方差分析,计量资料采用x±s表示。结果：1.血清和支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞计数统计分析结果：在模型组计数与对照组相比均呈高表达（P<0.05）。2.家兔血清样本代谢产物统计学分析结果：异柠檬酸：对照组与模型组有差别（P<0.05）,模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）；果糖：对照组与模型组有差别（P<0.05）,模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）；葡萄糖酸：对照组与模型组无差别（P>0.05）,模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）；6-脱氧吡喃甘露糖：对照组与模型组有差别（P<0.05）,模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）；硬脂酸：对照组与模型组无差别（P>0.05）,模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）；半乳糖醛酸：对照组与模型组有差别（P<0.05）,模型组与仙味保金方组无差别（P>0.05）。3.家兔支气管肺泡灌洗液样本代谢产物统计学分析结果：甘氨酸：对照组与模型组有差别（P<0.05）、模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）；天冬氨酸：对照组与模型组有差别（P<0.05）、模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）；十四酸：对照组与模型组有差别（P<0.05）、模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）；半乳糖：对照组与模型组有差别（P<0.05）、模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）。4.家兔尿液样本代谢产物统计学分析结果：对羟基苯乙酸：对照组与模型组无差别（P>0.05）,模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）；木糖醇：对照组与模型组无差别（P>0.05）,模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）；3,5-二羟基苯甲酸：对照组与模型组无差别（P>0.05）,模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）；硬脂酸：对照组与模型组有差别（P<0.05）、模型组与仙味保金方组有差别（P<0.05）结论：1.卵蛋白致敏新西兰家兔可成功建立过敏性支气管哮喘模型。2.支气管肺泡灌洗液样本代谢产物中的甘氨酸、天冬氨酸、十四酸、半乳糖含量在模型组升高,说明与过敏性支气管哮喘病理变化有关。3.支气管肺泡灌洗液样本代谢产物中的甘氨酸、天冬氨酸、十四酸、半乳糖含量在仙味保金方组的含量比模型组明显降低,说明仙味保金方具有修复代谢网络的作用。4.血清样本代谢产物中的异柠檬酸、半乳糖醛酸、果糖、6-脱氧吡喃甘露糖在模型组含量改变,说明这些产物与过敏性支气管哮喘具有相关性。5.血清样本代谢产物中的异柠檬酸、果糖、葡萄糖酸、硬脂酸、6-脱氧吡喃甘露糖含量在仙味保金方组发生变化,说明这些产物与仙味保金方中药成分发挥作用有关。6.尿液样本代谢产物中的硬脂酸在模型组含量改变,说明与过敏性支气管哮喘具有相关性。7.尿液样本代谢产物中的对羟基苯乙酸、木糖醇、3,5-二羟基苯甲酸和硬脂酸在仙味保金方组含量改变,说明这些产物与仙味保金方中药成分发挥作用有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写
• 文献综述
• 综述一 中医学对过敏性支气管哮喘的认识与治疗优势
• 一、中医学对过敏性支气管哮喘的认识
• 1 古今文献对过敏性支气管哮喘的相关理论研究
• 1.1 古代文献的相关论述
• 参考文献
• 1.2 近二十年现代文献的相关论述
• 1.2.1 检索策略
• 1.2.2 文献纳入标准
• 1.2.3 文献检索结果
• 参考文献
• 2 近二十年有关中医药治疗过敏性支气管哮喘（哮病）的临床与模式生物研究现状
• 2.1 检索策略
• 2.2 文献纳入标准
• 2.3 文献检索结果
• 2.3.1 临床研究现状
• 2.3.2 模式生物研究现状
• 参考文献
• 二、中医药治疗过敏性支气管哮喘的优势与特色
• 参考文献
• 综述二 代谢组学在中医药研究领域的应用与展望
• 一、概述
• 二、文献综述方法
• 1 检索策略
• 2 文献纳入标准
• 3 文献检索结果
• 3.1 代谢组学的研究内容
• 3.2 代谢组学的技术平台
• 3.3 代谢组学的优点
• 3.4 代谢组学在中医药研究中的应用
• 3.5 代谢组学在中医药领域的展望
• 参考文献
• 前言
• 仙味保金方治疗法则及方药研究
• 一、肺脏的中医生理、病理特性
• 二、肺脏用药性味特点
• 1 药味宜辛、宜酸
• 2 药性宜温润
• 三、通过五行生克及与脏腑相配关系论治肺病
• 四、通过脏腑表里关系论治肺病
• 五、"温润辛金培本平喘"法则的确立
• 六、仙味保金方药的处方资料
• 1 方药组成
• 2 剂量
• 3 功能、主治病证
• 4 方解
• 参考文献
• 实验研究
• 一、前期研究背景
• 1 仙味保金方对过敏性支气管哮喘小鼠细胞因子网络调控的研究
• 2 确定代谢物组类型
• 二、实验材料
• 1 实验动物
• 2 实验药物及制备
• 3 主要试剂及仪器
• 三、实验方法
• 1 实验动物分组
• 2 动物模型的建立
• 2.1 前期动物模型研究基础
• 2.2 造模方法
• 3 给药方法
• 4 标本的采集
• 4.1 家兔耳缘静脉血的制备
• 4.2 家兔支气管肺泡灌洗液的制备
• 4.3 家兔尿液的制备
• 5 代谢组学分析
• 5.1 样品制备
• 5.2 代谢产物的检测
• 5.3 统计学处理
• 四、实验结果
• 1 家兔一般状态的变化
• 2 病理变化
• 2.1 静脉血
• 2.2 支气管肺泡灌洗液
• 3 代谢组学检测结果
• 3.1 血清样本代谢产物检测结果
• 3.2 支气管肺泡灌洗液样本代谢产物检测结果
• 3.3 尿液样本代谢产物检测结果
• 五、讨论
• 1 家兔过敏性支气管哮喘模型验证
• 2 代谢产物与过敏性支气管哮喘及方药的相关性分析
• 2.1 检索策略
• 2.2 文献纳入标准
• 2.3 文献检索结果
• 2.3.1 支气管肺泡灌洗液样本代谢产物与过敏性支气管哮喘及中药复方的相关性
• 2.3.2 血清样本代谢产物与过敏性支气管哮喘及中药复方的相关性
• 2.3.3 尿液样本代谢产物与过敏性支气管哮喘及中药复方的相关性
• 参考文献
• 结论
• 附图
• 致谢
• 个人简历