RNAi分级阻断NMBR、NF-κB表达对小鼠子宫平滑肌细胞中IL-6表达的影响

论文摘要

目的：通过特异性的siRNA分级阻断NMBR和NF-κB的表达,了解其对小鼠子宫平滑肌细胞中IL-6表达的影响。方法：1.采用产时或产后2小时之内的小鼠子宫平滑肌细胞进行原代培养及鉴定。确定NMB浓度梯度为：10-10M、10-8M、10-6M、10-4M（简称为10-10——10-4M）,实验分为以下几组（1）对照组,不加任何干预因子；（2）NMB组；（3） siRNA+NMB组。2.按照细胞转染的方法分别进行细胞的NMBR siRNA和NF-κBp65 siRNA转染并检测转染效率,加入不同浓度的NMB干预。3.分别利用磷酸化ELISA、real-time PCR、ELISA法检测siRNA转染前后小鼠子宫平滑肌细胞中NF-κB p65的DNA结合活性、IL-6mRNA及蛋白表达水平。结果：1. NMBR siRNA干预对小鼠子宫平滑肌细胞NF-κB p65的DNA结合活性、IL-6表达水平的影响。NF-κB p65的DNA结合活性、IL-6的表达在10-8、10-6、10-4NMB组（三组高浓度梯度,以下均简称为10-8——10-4NMB组）均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,且其值随浓度递增而递增,10-10NMB组（低浓度梯度组）与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）, NMB各组间差异有统计学意义（P<0.05）; NMB+NMBR siRNA组均低于同浓度NMB组,差异有统计学意义（P<0.05）,但NMB+NMBR siRNA各组间差异无统计学意义（P>0.05）。2. NF-κB p65 siRNA干预对小鼠子宫平滑肌细胞IL-6表达水平的影响。IL-6的表达在10-8——10-4NMB组均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,且其值随浓度递增而递增,10-10NMB组与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）, NMB各组间差异有统计学意义（P<0.05）; NMB+ p65 siRNA组均低于同浓度NMB组,差异有统计学意义（P<0.05）,但NMB+ p65 siRNA各组间差异无统计学意义（P>0.05）。3. NMBR siRNA干预实验中NF-κB p65的DNA结合活性与IL-6mRNA的相关性分析。IL-6 mRNA的变化与p65的变化有明显的正相关（r=0.952,P<0.01）：4.分级阻断NMBR和NF-κB通路对IL-6表达影响的比较。结果示对IL-6 mRNA表达影响的差异无统计学意义（P>0.05）。结论：1.通过siRNA分级阻断NMBR和NF-κB,可下调分娩期小鼠原代子宫平滑肌细胞IL-6的表达；2.在分娩期小鼠原代子宫平滑肌细胞中,NMBR可能借助NF-κB通路,调控IL-6的表达,借以影响子宫平滑肌细胞的活动。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 缩略词表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验试剂和仪器
• 2.2 实验方法及步骤
• 第三章 结果
• 3.1 NMBR siRNA干预对NF-κB p65DNA结合活性及IL-6表达水平的影响
• 3.2 NF-κB P65 siRNA干预对IL-6表达水平的影响
• 3.3 NMBR siRNA干预实验中NF-κB p65DNA结合活性与IL-6的相关性分析
• 3.4 NMBR siRNA和NF-κB p65 siRNA两种不同的干预对IL-6表达水平影响的比较
• 第四章 讨论
• 4.1 NMBR siRNA干预对NF-κB P65DNA结合活性及IL-6表达的影响
• 4.2 NF-κB P65 siRNA干预对IL-6表达的影响
• 4.3 NMBR对IL-6表达调节作用的意义
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述 NMBR——NF-κB IL-6/HSP70通路在分娩发动中的作用研究进展
• 致谢