动物性食品和水中雌激素残留污染检测的研究

论文摘要

人类的生存环境中正面临着多种潜在的雌激素来源,直接或间接地影响整个生物界的平衡与协调。我国已禁止在食品动物中使用雌激素,但仍有养殖户非法使用,已严重影响了人民身体健康和我国出口贸易。而到目前为止,我国只对畜、禽肉中的己烯雌酚制定了国家标准检验方法,其它各类的雌激素均无国家标准检验方法,因此有必要建立一套完整灵敏的雌激素类物质检测手段,便于对动物性食品和水中的相关激素进行统一有效的监控。本研究建立了可用于畜禽肉和水中同时检测雌三醇、雌二醇、炔雌醇、雌酮和己烯雌酚的高效液相色谱方法。前处理方法是:畜禽肉样品经三羟基甲基氨基甲烷溶液和甲醇提取,Oasis HLB固相萃取小柱（6 mL/200 mg）浓缩净化;水样直接经Alhech Extract-clean columns C18固相萃取小柱（200 mg/4.0 mL）浓缩净化。反相色谱检测,色谱条件为:Eclipse XDB-Cl8 5μm,4.6 mm×150 mm色谱柱;流动相:乙腈-水,采用梯度洗脱方式0～3 min乙腈/水（v/v,35:65）,3～7 min乙腈由35%升至52%,保持8 min;流速:1.0 mL/min;AUFS:0.01;DAD二极管阵列检测器,检测波长210 nm;柱温:25℃。此条件下,五种雌激素分离效果好,标准曲线线性良好,相关系数r>0.9993,方法的检出限:水样为14～18 ng/L,畜禽肉为3.9～4.9 ng/g,有较好的准确度和精密度,回收率为68%～106%,相对标准偏差小于6%。用以上方法对鸡肉、猪肉和地下水、地面水等不同样品进行检测,共检出雌二醇、炔雌醇、雌酮和己烯雌酚四种雌激素,并采用液相色谱-质谱联用法对阳性样品进行了确证实验,初步探讨了5种雌激素的裂解途径及其合理化碎片,对本实验方法的确立提供了充实的依据。结果表明本实验方法操作简便,适于动物性食品和水中痕量雌激素物质的分析。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 绪论
• 1.1 雌激素的性质及临床作用
• 1.1.1 雌二醇
• 1.1.2 雌三醇
• 1.1.3 雌酮
• 1.1.4 炔雌醇
• 1.1.5 己烯雌酚
• 1.2 动物性食品和水中雌激素残留的主要途径及危害
• 1.2.1 残留的主要途径
• 1.2.2 残留的危害
• 1.3 动物性食品和水中激素类物质的分析检测技术进展
• 1.3.1 化学检测法
• 1.3.1.1 气相色谱法
• 1.3.1.2 高效液相色谱法
• 1.3.1.3 色谱－质谱联用法
• 1.3.1.4 高效薄层色谱法
• 1.3.2 免疫分析法
• 1.3.2.1 放射免疫分析法
• 1.3.2.2 酶联免疫分析法
• 1.3.2.3 发光免疫分析法
• 1.3.3 检测方法的发展趋势
• 1.4 本项研究的目的和意义
• 1.5 本课题研究思路与内容
• 第二章 五种雌激素标准品同时分析的HPLC 色谱条件研究
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 标准溶液的配制
• 2.2.1.1 标准储备液的配制
• 2.2.1.2 混合标准中间溶液的配制
• 2.2.1.3 混合标准工作溶液系列的配制
• 2.2.2 色谱条件
• 2.3 结果和讨论
• 2.3.1 实验条件的选择
• 2.3.1.1 色谱柱的选择
• 2.3.1.2 检测波长的选择
• 2.3.1.3 流动相及AUFS 值的选择
• 2.3.1.4 洗脱梯度和流速的选择
• 2.3.1.5 柱温的选择
• 2.3.2 雌激素的定性及定量分析
• 2.3.3 标准曲线的制作
• 2.3.4 检出限
• 2.3.5 精密度实验
• 2.3.6 重复性考察
• 本章小结
• 第三章 水中雌激素检测HPLC 方法研究及应用
• 3.1 仪器与试剂
• 3.1.1 仪器
• 3.1.2 试剂
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 色谱条件
• 3.2.2 前处理方法
• 3.2.3 样品测定
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 固相萃取柱的选择
• 3.3.2 洗脱液的选择
• 3.3.3 洗脱液体积的确定
• 3.3.4 样品体积的选择
• 3.3.5 固相萃取和液液萃取的比较
• 3.3.6 方法的检出限和线性关系
• 3.3.7 回收率和精密度
• 3.3.8 固相萃取柱的再生次数
• 3.4 方法应用
• 本章小结
• 第四章 畜禽肉中雌激素残留检测HPLC 方法研究及应用
• 4.1 仪器与试剂
• 4.1.1 仪器
• 4.1.2 试剂
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 色谱条件
• 4.2.2 样品前处理方法
• 4.2.3 样品测定
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 样品前处理条件的选择
• 4.3.1.1 提取条件的选择
• 4.3.1.2 固相萃取柱的选择
• 4.3.1.3 固相萃取条件的选择
• 4.3.1.4 洗脱液最佳洗脱体积的确定
• 4.3.2 固相萃取和甲醇直接提取的比较
• 4.3.3 方法的线性和最低检出浓度
• 4.3.4 方法的回收率和精密度
• 4.3.5 方法应用
• 本章小结
• 第五章 质谱的确证实验
• 5.1 仪器与试剂
• 5.1.1 仪器
• 5.1.2 试剂
• 5.2 样品分析
• 5.2.1 质谱条件
• 5.2.2 结果和讨论
• 5.2.2.1 标准品的分析
• 5.2.2.2 一级质谱图的解析
• 5.2.2.3 裂解途径
• 5.2.2.4 各物质碎片的比对分析
• 5.2.2.5 定性测定
• 本章小结
• 主要研究结论
• 研究展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文