苯扎贝特对ox-LDL所诱导的人脐静脉内皮细胞PAI-1表达的影响及其机制

论文摘要

背景和目的:血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体（Lectin-like oxidized low density lipoproteinrecaptor-1,LOX-1）是存在于血管内皮细胞表面的氧化低密度脂蛋白（oxidized low-densitylipoprotein,ox-LDL）的特异性受体,二者特异性结合产生内皮细胞的损伤效应并触发一系列的内信号通路,参与高血压、血栓症和动脉粥样硬化（Artherosclerosis,AS）等的形成。1型纤溶酶原激活物抑制剂（plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1）是体内主要的血浆纤溶酶原激活物抑制剂,调节和维持纤溶系统与凝血系统的动态平衡。血浆PAI-1水平的升高与许多血栓性疾病,如动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗死、脑梗塞等密切相关。过氧化体增殖物激活型受体α（peroxisome proliferators-activated receptors alaph,PPARα）是一类由配体激活的核转录因子,具有多种生物学效应,在机体生理和病理过程中具有多方面的重要功能。它可以调节致动脉粥样硬化、血管炎症反应,斑块不稳定以及血栓形成的关键蛋白的表达。因此,PPARα在血管壁上发挥抗动脉粥样硬化。苯扎贝特是人工合成的外源性PPARα的激活物,它对ox-LDL所诱导的HUVECs表达LOX-1、PAI-1的影响及其机制尚不十分明确。本课题采用了分子生物学方法就此做了研究,共分为两个部分:第一部分LOX-1对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞LOX-1、PAI-1的表达的影响目的:用不同浓度的ox-LDL干预后内皮细胞后,观察ox-LDL对内皮细胞PAI-1和LOX-1表达的影响及LOX-1在其中的作用。方法:体外培养HUVECs,采用形态学及抗Ⅷ因子抗体免疫荧光染色行内皮细胞鉴定。选择生长良好的第2～5代细胞用于实验。实验分组:①正常对照组:普通培养基;②不同浓度ox-LDL组:培养基中分别加入终浓度为10ug/mL、25ug/mL、50ug/mL、100ug/mL的ox-LDL培养24h;③LOX-1阻滞剂组:加终浓度为250ug/mL Poly（I）预先作用2h,然后再加终浓度为50ug/mLox-LDL培养24h。采用倒置显微镜观察内皮细胞形态变化,通过RT-PCR测定LOX-1、PAI-1mRNA表达,Western-blot测定LOX-1蛋白的表达,Elisa方法测定PAI-1蛋白的表达。结果:1.荧光显微镜下观察显示,正常对照组细胞结构清晰,胞浆丰富,核呈绿色或黄绿色荧光,处理24h后的绿色荧光强度弱减,红色荧光明显加强,细胞结构不清,胞浆减少。在ox-LDL基础上加入LOX-1阻滞剂后,上述作用明显减弱。2.不同浓度的ox-LDL可以上调LOX-1、PAI-1 mRNA表达,与正常对照组比较皆具有统计学意义,P＜0.001)。此外,在本研究所限ox-LDL浓度范围内,HUVECs LOX-1及PAI-1mRNA表达与ox-LDL浓度呈明显的剂量-效应（采用Person相关分析P＜0.01）关系。3.不同浓度的ox-LDL可以上调LOX-1、PAI-1蛋白表达,与正常对照组比较,皆具有统计学意义,P＜0.01),在本研究所限ox-LDL浓度范围内,HUVECs LOX-1及PAI-1蛋白表达与ox-LDL浓度呈明显的剂量-效应（采用Person相关分析P＜0.01）关系。4.用250ug/mL poly（1）与HUVECs预先作用2h后,再加入50ug/mL的ox-LDL培养24h,与未加poly（1）相比,LOX-1和PAI-1 mRNA和蛋白的表达均明显减少（P＜0.05）。结论:1.证实了ox-LDL可以诱导人脐静脉内皮细胞LOX-1 mRNA和蛋白的高表达,呈浓度依赖关系,且部分通过LOX-1。2.证实ox-LDL可以诱导人脐静脉内皮细胞PAI-1 mRNA和蛋白的高表达,呈浓度依赖关系,此作用的机制研究表明可能部分通过LOX-1介导。第二部分苯扎贝特对ox-LDL对所诱导人脐静脉内皮细胞PAI-1表达的影响及机制研究目的:观察苯扎贝特对ox-LDL所诱导的HUVECs表达LOX-1、PAI-1 mRNA及蛋白的影响并探讨其作用机制。方法:体外培养HUVECs,采用形态学及抗Ⅷ因子抗体免疫荧光染色行内皮细胞鉴定。选择生长良好的第2～5代细胞用于实验。实验分组:①ox-LDL组:培养基中加入终浓度50mg/L ox-LHUVECsDL培养24h;②苯扎贝特组:50、100、200mmol/mL苯扎贝特预先作用内皮细胞2h,再加入终浓度为50mg/L ox-LDL培养24h;③LOX-1阻滞剂组+100mmol/mL苯扎贝特:终浓度为250mg/L Poly（I）预先作用内皮细胞2h后,加入终浓度为100mmol/mL苯扎贝特预先作用内皮细胞2h,最后加入终浓度为50mg/L ox-LDL培养24h。通过RT-PCR测定LOX-1、PAI-1 mRNA表达,Western-blot、Elisa分别测定LOX-1、PAI-1蛋白的表达。结果:1.不同浓度苯扎贝特（50、100、200mmol/mL）组,与50mg/L ox-LDL组比较,LOX-1与PAI-1 mRNA和蛋白的表达均明显减少（P＜0.05）,组间比较有统计学意义,浓度越大,减少的越明显（P＜0.05）;2.poly（I）+100mmol/mL苯扎贝特组,与100mmol/mL苯扎贝特组比较,LOX-1与PAI-1mRNA和蛋白的表达显著减少（P＜0.05）;结论1.苯扎贝特为人工合成的PPARα激动剂,可以明显抑制ox-LDL诱导的HUVFCs表达LOX-1、PAI-1,呈浓度依赖关系。2.该抑制作用可能部分通过LOX-1介导。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文
• 前言
• 第一部分 Lox-1介导了ox-LDL对所诱导的人脐静脉内皮细胞PAI-1的表达
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 苯扎贝特对ox-LDL对所诱导的内皮细胞PAI-1表达的影响及其机制探讨
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 个人简介
• 致谢