冠状病毒HCoV-229E S1蛋白片段的原核表达及鉴定

论文摘要

目的:人冠状病毒（HCoV-229E）属Ⅰ型冠状病毒,是引起人类上呼吸道感染的病原,常引起人的普通感冒。其基因组RNA是一不分节段的正链单股RNA,长约27 kb,已知编码11种蛋白,其中包括4种结构蛋白,分别是刺突蛋白（S）、包膜蛋白（M）、小包膜蛋白（E）和核衣壳蛋白（N）。S蛋白三聚体形成突起,伸出包膜表面,是病毒的主要表面抗原成分,具有受体结合和膜融合活性,在组织嗜性、细胞融合和毒力等方面起重要作用。S蛋白由S1和S2两个亚基组成,其中S1形成成熟蛋白的球状部分,包括受体结合区（RBD）和高变区（HVR）,而S2相对保守,包括一段内在的融合肽和两段疏水的七次重复区域（HR1和HR2）。这些区域对于病毒的侵入、细胞与细胞间的融合具有重要意义。本研究将靶蛋白锁定为S1蛋白片段（S1 417—547位氨基酸）,克隆获得冠状病毒HCoV-229E S1基因片段（S1蛋白1249-1642位核苷酸）,在原核表达系统大肠杆菌中获得高效表达,对表达蛋白加以纯化,初步研究其抗原活性。方法:根据Genbank提供的HCoV-229E株S基因序列（DQ243973）人工合成冠状病毒HCoV-229E S1蛋白特异性基因片段,并克隆入pET-21a原核表达载体,构建克隆载体pET-21a-S1,通过PCR鉴定。重组载体转化宿主菌BL21（DE3）,经IPTG高效诱导表达得到重组蛋白,用金属螯合亲和层析纯化,并通过SDS-PAGE电泳及Western blot对表达的重组蛋白进行鉴定。结果:获得了主要以包涵体形式存在的目的蛋白,Western blot鉴定其为S1基因片段蛋白。结论:成功构建了HCoV-229E S1蛋白的表达载体,并在BL21（DE3）中得到了高效表达,为下一步表达蛋白免疫原性及疫苗抗病毒保护性测定打下了基础。

论文目录

• 一 中文摘要
• 二 英文摘要
• 三 前言
• 四 文献综述
• 五 材料与方法
• 六 结果
• 七 讨论
• 八 结论
• 九 参考文献
• 十 致谢
• 十一 英文缩写