冠心病患者急性期血管内皮细胞损伤的方法学研究

论文摘要

目的探讨冠心病患者急性期血管内皮细胞(VEC)、循环内皮细胞(CEC)损伤的特点，构建检测内皮细胞损伤的技术平台，为冠心病的发生、发展、转归，甚至早期预防及诊断提供新的理论依据和实验室指标。方法选2005年8月～2006年8月兰州大学第一、第二医院心胸外科确诊适于心脏搭桥的冠心病急性期患者65例，同期兰州大学第一、第二医院健康体检者38例为对照组。应用流式细胞仪、单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测65例冠心病急性期患者和38例健康对照CEC的含量、细胞核DNA的损伤；以琼脂糖凝胶电泳技术(AGE)进一步检测其损伤的原因。应用电子显微镜技术检测病变血管内皮细胞的损伤情况。结果流式细胞仪计数显示冠心病急性期患者CEC数量显著升高，与对照组相比有显著性差异(32.6±9.1/ml vs 4.17±1.23/mL，P＜0.01)，经Spearman’s相关分析发现在冠心病急性期病变血管VEC损伤程度与对应患者外周血的CEC计数城显著正相关(r=2.83,P＜0.05)。SCGE结果表明冠心病急性期组患者92.92％±6.95％CEC核DNA电泳呈明显的“彗星”状，其彗尾DNA％含量为41.12％±3.77％；正常对照组10.49％±4.45％CEC核DNA表现为“彗星”状，其彗尾DNA％含量为7.33％±2.53％。冠心病急性期组与正常对照组彗星率、彗尾DNA％含量相比均有显著性差异(P＜0.001)，VEC的损伤程度与CEC核DNA的程度呈明显正相关(r=3.43,P＜0.05)。AGE结果提示冠心病急性期组CEC呈典型的不规则泳带，损伤以坏死为主要表现，正常对照组CEC仅呈现均匀的单一泳带。电子显微镜显示：冠心病急性期患者病变血管组织VEC细胞膜有明显损伤，部分VEC脱落，平滑肌暴露；线粒体、高尔基体肿胀，溶酶体增多，呈坏死样改变。VEC损伤程度与冠心病严重程度相一致，与CEC的结果相似。结论1．本实验室建立的Percoll密度梯度离心法从冠心病急性期患者的外周血中能富集到CEC，流式细胞仪可以进行CEC计数。2．扫描电镜观察VEC损伤与CEC计数之间的相关性以及Ⅷ因子相关抗原荧光染色VEC和CEC结果证明CEC来源于VEC。3．SCGE显示冠心病急性期患者CEC细胞核DNA有明显损伤，透射电镜观察VEC有细胞膜的损伤、线粒体、高尔基体、内质网明显肿胀、溶酶体大量增多，部分细胞开始溶解，AGE结果也证实CEC细胞损伤是坏死而不是凋亡。4．CEC计数和SCGE均是反映VEC损伤的重要方法，流式细胞仪计数CEC在冠心病的早期应用较为理想。当疾病较为严重时，CEC计数并不能反映VEC的损伤情况，此时联合进行单细胞凝胶电泳则可以很好地弥补这一缺陷。另外在没有流式细胞仪的实验室，SCGE仍是一种检测细胞核DNA损伤的实验室方法。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表文章
• 致谢
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