论文摘要
目的:探讨c-src及其蛋白在原始卵泡当中的表达、分布及其在原始卵泡生长发育中的作用和机理。方法:取2日龄SD雌性大鼠卵巢,在Waymouth培养体系中培养0、4、8天后做石蜡组织HE染色、免疫组化、原位杂交,观察各级卵泡数及c-src mRNA和蛋白在其中的表达、分布及含量变化;用腺病毒包装c-src小干扰片断转染培养中的卵巢组织进行RNA干扰,或者在培养时加入MAPK抑制剂（PD98059）、PKC抑制剂（Calphostin）、PI3K抑制剂（LY294002）,用RT-PCR、Western blot等方法检测RNA干扰及加入各种抑制剂后c-src mRNA和Src蛋白的表达以及p-ERK1/2蛋白、p-PKC蛋白、p-PI3K蛋白的表达的情况,用石蜡组织HE染色检测RNA干扰及加入各种抑制剂后原始卵泡的发育情况。结果:1.随着培养天数的增加,原始卵泡在卵泡总数中所占比例逐渐减少;c-src mRNA在各组原始卵泡中均有表达,分布由卵母细胞胞浆逐渐扩散到卵母细胞和颗粒细胞的胞浆中;同时,随着培养天数的增加,c-src mRNA表达量增加。Src蛋白在各组原始卵泡中均有表达,分布由卵母细胞和颗粒细胞的胞膜逐渐转变为卵母细胞膜、颗粒细胞胞膜和胞浆中;同时,随着培养天数的增加,Src蛋白表达量增加。2.DNA测序检测大鼠卵巢中的c-src mRNA RT-PCR扩增产物序列（250bp）,并与GeneBank中的序列比较,发现两者结果一致。3.转染c-src siRNA后,用RT-PCR,western blot方法检测靶基因c-src表达,发现RNA干扰后,与空白组、空白载体组相比,最佳干扰组c-src mRNA含量明显下降,原始卵泡在卵泡总数中所占比例相对更多,原始卵泡发育受到抑制;而加入抑制剂各组c-src mRNA含量无明显变化,但原始卵泡在卵泡总数中所占比例也相对更多,原始卵泡发育同样受到抑制。4.c-src siRNA及加入各种抑制剂后,c-src最佳干扰组Src蛋白含量明显减少,其余各组无明显变化;c-src最佳干扰组、PD98059组、Calphostin组和LY294002组p-ERK1/2蛋白含量明显减少,其余各组无明显变化;c-src最佳干扰组、Calphostin组、LY294002组PKC蛋白含量明显减少,而PD98059组无明显变化;c-src最佳干扰组、LY294002组PI3K蛋白含量明显减少,其余各组PI3K蛋白含量无明显变化。结论:1.c-src mRNA及蛋白在原始卵泡中有表达,其分布和含量随着培养天数的增加而变化。2.c-src在原始卵泡的发育中起重要的作用。3.c-src能通过ERK1/2、PKC、PI3K这几种信号通路促进原始卵泡的发育,其上下游关系可能是:c-src→p-PI3K→p-PKC→p-ERK1/2。