论文摘要
结肠癌是我国常见恶性肿瘤之一,占全部癌症的6.8%,结肠癌死亡率为3.54/10万,占癌症死亡率的5.29%,居第6位。引起患者死亡的主要原因是肿瘤的侵袭与转移。血管生成对实体瘤的快速生长和转移非常重要,是肿瘤研究的热点。肿瘤血管期的启动是由瘤细胞产生促血管内皮细胞增殖和迁移的血管生成因子所诱发,而其中血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）极为重要,胎盘生长因子（placenta growth factor,PIGF）系VEGF家族新成员,已发现在很多肿瘤中有不同程度的表达,但对结肠癌的研究相对较少,对PIGF在肿瘤发生、发展中的促血管生成作用研究缺乏资料。本试验通过对结肠癌及癌旁组织的VEGF、PIGF表达研究,探讨VEGF、PIGF在结肠癌及癌旁组织的表达水平之间的相关性,以进一步明确结肠癌预后影响因素,指导临床治疗,提高患者生存率。材料及方法:1.材料97例结肠癌来自沈阳军区总医院,从2002年至2005年外科手术切除标本,年龄从25到69岁不等,男63例,女34例,术前均未接受放疗、化疗。其中高分化31例,中分化32例,低分化期34例。同时选取癌旁组织30例（其中按分化程度不同,各取10例）,所选蜡块重新切片,HE染色及形态学复习。2.方法免疫组化方法:P1GF多克隆抗体购自美国SantaCruz公司,CD34、VEGF单克隆抗体均由上海长岛试剂公司提供,采用链霉菌抗生物素蛋白一氧化物酶连接法（Streptavidin/Peroxidase,SP）按常规步骤进行,除—抗分别为CD34、VEGF、P1GF外,其余步骤均相同。阴性对照采用0.01MPBS液体代替一抗,其他步骤不变,阳性对照采用内对照。3.结果判定3.1肿瘤微血管密度（MVD）判断标准:CD34标记微血管,计算肿瘤内着色的毛细血管和微小血管。按照Weidner[1]的评判标准,凡呈现棕色单个内皮细胞或内皮细胞簇均作为1个血管计,但肌层较厚及管腔面积大于8个红细胞直径的血管不计数。计数方法:在200倍视野下计数每个视野内CD34阳性血管数,每例随机选择4个不重复的视野进行计数,求出平均值,计算每例单位视野内平均血管数,即为该例肿瘤的微血管密度（microvessel-density,MVD）值（个/x200）。3.2 VEGF、PIGF判断标准:VEGF与PIGF均在以细胞浆呈现棕黄色着色,CD34表达阳性为血管内皮细胞被染成黄褐色。3.3统计分析:数据统计应用SPSSll.5软件,采用x2检验、t检验和Spearman等级相关分析。结果:VEGF在68.04 %（67/97）的结肠癌组织表达, VEGF阳性的结肠癌组织MVD为38.2±1.4/高倍视野。VEGF阴性组织中MVD为22.1±2.2/高倍视野,两者差异有显著性差异（P<0.01）。PIGF阳性肠癌组织MVD为34.1±1.4/高倍视野,PIGF阴性肠癌组织为30.8±2.6/高倍视野,两者差异亦有显著性差异（P<0.01）。结肠癌中PIGF、VEGF蛋白表达阳性率和微血管密度计数（MVD）明显高于正常结肠黏膜组织（P< 0.05）,结肠癌中PIGF、VEGF蛋白表达阳性率和MVD呈明显正相关,免疫组化检测结果发现,在97例结肠癌中, VEGF、PIGF在结肠癌的表达与癌旁组织存在差异（P<0.05）。低分化型结肠癌MVD值也明显高于中、高分化型结肠癌（P<0.05）,而后两者MVD值之间差异无显著性（P>0.05）。相关分析发现,在结肠癌中,VEGF表达与MVD值呈明显正相关（r=0.541,P<0.01）,PIGF表达与MVD值亦呈明显正相关（r=0.392,P<0.01）。对比PIGF与VEGF在MVD的表达上有明显相关。结论:1、VEGF在三型结肠癌组织与癌旁组织中均有不同程度的表达,两者有差异性。VEGF在低分化腺癌与中、高分化腺癌之间有差异性。2、PIGF在三型结肠癌组织与癌旁组织中均有不同程度的表达,两者有差异性。PIGF在低分化腺癌与中、高分化腺癌之间有差异性。3、VEGF、PIGF在三型结肠癌,尤其是低分化的结肠癌血管生成中发挥协同作用,两者之间有相关性。对于今后进一步应用抗血管新生药物治疗结肠癌,提高患者生存率提供了一条新途径。