论文摘要
背景：大量的临床回顾性研究发现，早期创伤性应激事件，如年幼丧亲、长期与父母分离以及儿童期受虐或忽视等，可增加成年后抑郁、躁狂、精神分裂症等精神疾病的发病率。研究资料说明，单胺类神经系统功能异常、下丘脑-垂体-肾上腺轴（Hypothalamic-Pituitary-Adrenal axis，HPA）的过度激活、脑内炎性细胞因子的过度表达等可能参与早期应激的过程。然而，由于临床研究的周期长、生物材料难以获得和人体研究的道德要求等局限性，生命早期应激的动物模型将为该领域的研究提供平台。目前被认可的应用于啮齿类动物的生命早期应激是母爱剥夺模型，它能较好地模拟人类在生命早期母爱的丧失，并能观察到成年后行为的改变。母爱剥夺模型主要分为两种，第一种是短期的剥夺，如母子仅分离24小时；第二种是长期的剥夺，一般分为两个阶段：（1）母婴分离阶段（母乳期），（2）隔离饲养阶段（断乳后至成年）。其中母婴分离相当于人类在生命早期母爱的丧失，隔离饲养则相当于人类在成年前社会交往行为的减少或丧失。不多的母爱剥夺动物模型的研究报导了母爱剥夺对动物行为以及大脑神经元再生、神经生化改变的影响，母爱剥夺动物模型将为生命早期应激的研究提供良好的研究平台。因此，本研究拟1、建立“生命早期母爱剥夺导致成年后行为异常”的大鼠动物模型，从母爱剥夺的时机和强度、行为学检测手段等方面，选择有效的刺激条件和检测指标；从海马5-HT1A受体的表达方面分析生命早期母爱剥夺导致成年后行为异常的机制；在此模型上研究成年后母爱剥夺大鼠对慢性应激的行为学反应以及对海马5-HT1A受体表达的影响。实验一：目的：以母爱剥夺为应激手段，以自发活动和穿梭逃避为行为学检测手段，建立生命早期的应激模型。观察新生大鼠母爱剥夺对成年后行为和海马CA1区5-HT1A受体表达的影响。材料和方法：实验动物为3月龄雌雄Sprague-Dawley（SD）大鼠，合笼生产后，新生鼠按随机数字表随机分为母爱剥夺组和正常对照组，母爱剥夺组（38只）：出生后第2-21天给予每天母婴分离1h；正常对照组（20只）：出生后正常饲养，不给予任何处理。观察新生期母爱剥夺对大鼠成年（2月龄）后行为（自发活动和穿梭箱主动回避反应的习得率的变化）的影响，并以免疫组化技术检测海马CA1区5-HT1A受体蛋白的表达。实验结果用Excel 2000和SPSS 11.0统计软件进行分析处理。结果以均数±标准差（X±S）表示，采用t检验（T-test）进行组间均数比较，P＜0.05为差异显著。结果：1．2月龄时以开场试验检测大鼠的自发活动，比较母爱剥夺组与正常对照组大鼠自发活动的总路程、休息时间、中央路程以及周边路程。结果表明，以上各项指标均无显著性差异（P＞0.05），表明新生期母爱剥夺的大鼠刚刚进入成年期的自发活动与同龄正常大鼠无显著差异。2．2月龄时以穿梭试验检测大鼠的学习记忆能力，比较母爱剥夺组与正常对照组大鼠主动回避反应的习得率，结果表明二者无显著性差异（P＞0.05），表明新生期母爱剥夺的大鼠刚刚进入成年期的学习记忆能力与同龄正常大鼠比较无明显差异。3．免疫组化结果显示5-HT1A受体阳性细胞分布在海马的CA1区的5-HT1A受体阳性细胞，新生大鼠母爱剥夺后满2月龄时，大鼠海马的CA1区的5-HT1A受体蛋白表达水平与Control组相比没有统计学差异（P＞0.05）。实验二：目的：新生期接受母爱剥夺的大鼠成年后再次接受慢性应激，观察其对大鼠的自发活动、学习记忆以及海马CA1区5-HT1A受体表达的影响。材料和方法：母爱剥夺组（MD）和正常组（N）大鼠满成年后，各分为2组，在2月龄时分为慢性应激组和对照组，慢性应激组接受10天慢性应激，对照组正常饲养，如此，四组动物分别为：母爱剥夺+慢性应激（MD+S）、母爱剥夺+对照（MD+C）、正常大鼠+慢性应激（N+S）、正常大鼠+对照（N+C）。以开场试验和穿梭箱主动回避试验检测大鼠的行为变化，运用免疫组化技术对5-HT1A受体蛋白在海马CA1区的表达进行分析。实验结果用Excel 2000和SPSS 11.0统计软件进行分析处理。结果以均数±标准误（X±SE）表示，采用单因素方差分析（ANOVA）和t检验（T-test）进行组间均数比较，P＜0.05为差异显著。结果：1．无论是母爱剥夺大鼠还是正常大鼠，在2月龄时接受10天慢性应激，与其对照组比较，开场试验的总路程显著减少（P＜0.001）、休息时间均大幅度延长（P＜0.01）、中央路程显著地减少（P＜0.01）。MD+S与N+S比较，总路程大幅度的减少（P＜0.001）、休息时间休息时间大幅度延长（P＜0.01）、中央路程大幅度减少（P＜0.01）。结果表明：慢性应激可显著地抑制大鼠的自发活动，而生命早期的母爱剥夺加重慢性应激对自发活动的抑制作用。2．无论是母爱剥夺大鼠还是正常大鼠，在2月龄时接受10天慢性应激，与其对照组比较，主动回避反应的习得率均有所降低（P＜0.05）。MD+S与N+S比较，习得率显著降低。结果表明：慢性应激可抑制大鼠的的学习记忆能力，而生命早期的母爱剥夺加重慢性应激对学习记忆能力的抑制作用。3．无论是母爱剥夺大鼠还是正常大鼠，在2月龄时接受10天慢性应激，与其对照组比较，大鼠海马的CA1区的5-HT1A受体蛋白表达水平均显著减少，有显著统计意义（P＜0.05）。MD+S与N+S比较，大鼠海马的CA1区的5-HT1A受体蛋白表达水平均显著减少，有显著统计意义（P＜0.05）。结论：实验结果显示，母爱剥夺组子鼠每天从母鼠身边移开3 h，当子鼠返回时母鼠不理睬子鼠，而正常对照组子鼠得到母鼠的注意和关照；结果表明被忽视的子鼠有明显地过度应激反应，这种反应一直持续到成年。此实验说明幼年时受到母亲关照对其成年后的神经心理发育有一定影响。新生期母爱剥夺的大鼠成年后再次受到慢性应激可以导致抑郁性行为和学习记忆功能的降低，大鼠海马CA1区的5-HT1A受体蛋白表达水平的降低。新生期母爱剥夺是大鼠成年后行为改变的重要原因，而5-HT1A受体的降低可能是其机制之一。