水溶性酵母葡聚糖的制备及其对家兔免疫功能的影响

论文摘要

本研究旨在研制出稳定的、安全的、无毒的水溶性酵母葡聚糖,并对其在抑菌以及对家兔免疫功能的影响等方面进行了研究。1.水溶性酵母葡聚糖的制备及其含量的测定本试验将水不溶性酵母葡聚糖通过化学修饰为水溶性酵母葡聚糖;并参照其他相关多糖含量测定的方法,以葡萄糖为标准品,应用苯酚-硫酸法对水溶性酵母葡聚糖含量测定的方法进行了研究。该法在0.010～0.500 mg/mL范围内呈良好的线性关系,线性方程为y=2.025x+0.1986,r2=0.9916;并求得水溶性酵母葡聚糖的多糖含量为85%。另外,还对本方法的重复性、回收率和稳定性等方面进行了试验。结果表明,该方法可应用于水溶性酵母葡聚糖含量的测定。2.水溶性酵母葡聚糖的安全性试验为了使水溶性酵母葡聚糖能够在临床上安全使用,本试验将水溶性酵母葡聚糖通过静脉、股四头肌注射方式注入新西兰家兔来检测其热原反应和肌肉刺激反应,通过腹腔注射注入小鼠体内来研究其急性毒性。热原检测试验结果表明,水溶性酵母葡聚糖中所含的致热性物质在规定的范围之内,可以进行静脉注射;肌肉刺激性检查结果表明,水溶性酵母葡聚糖所引起的肌肉刺激反应级别为1级,可以进行肌内注射;最大给药量试验表明,水溶性酵母葡聚糖对小鼠的最大给药量为240 mg/只（大约12 g/kg）,超过了安全标准的10 g/kg。故提示水溶性酵母葡聚糖是可以安全使用的。3.水溶性酵母葡聚糖的体外抑菌试验和体内抗感染试验本试验通过药敏纸片扩散法来研究水溶性酵母葡聚糖在体外对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和停乳链球菌的抑菌能力。通过体内抗感染试验来研究其在小鼠体内抗金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和停乳链球菌感染的能力。结果表明:水溶性酵母葡聚糖在体外对金黄色葡萄球菌有一定的抑菌能力,对大肠埃希菌和停乳链球菌没有抑菌能力;在体内,水溶性酵母葡聚糖对小鼠的保护率为37.5%～70%,而空白对照组小鼠的成活率仅为0%～25%,这表明水溶性酵母葡聚糖能提高小鼠对致病菌的抗感染能力。4.酵母葡聚糖金黄色葡萄球菌灭活苗的制备及免疫保护试验为了制备出稳定、安全和高免疫力的酵母葡聚糖金黄色葡萄球菌灭活苗,本试验将水溶性酵母葡聚糖添加到普通金黄色葡萄球菌灭活苗中,制备出酵母葡聚糖金黄色葡萄球菌灭活苗,分别注入小鼠和新西兰家兔体内来观察其安全性,并比较普通金黄色葡萄球菌灭活苗和酵母葡聚糖金黄色葡萄球菌灭活苗对小鼠的免疫保护率来检验酵母葡聚糖金黄色葡萄球菌灭活苗的高免疫力。结果表明:所制备的酵母葡聚糖金黄色葡萄球菌灭活苗符合常规疫苗的要求,与普通疫苗相比,能提高金黄色葡萄球菌普通疫苗30%的免疫保护率。5.酵母葡聚糖对金黄色葡萄球菌灭活苗免疫新西兰家兔效果的影响为了研究酵母葡聚糖对金黄色葡萄球菌灭活苗免疫新西兰家兔效果的影响,将酵母葡聚糖添加到金黄色葡萄球菌灭活苗中,配制成低（5 g/L）、中（10 g/L）、高（15 g/L）3个剂量的酵母葡聚糖金黄色葡萄球菌灭活苗,同时用不添加酵母葡聚糖的金黄色葡萄球菌灭活苗和生理盐水作为对照,分别给新西兰家兔皮下注射1 mL/只,在注射后第7 d、14 d、21 d、31 d、41 d和51 d,分别采血检测西兰兔淋巴细胞转化率和抗体水平。结果中剂量（10 g/L）的酵母葡聚糖金黄色葡萄球菌灭活苗能明显提高新西兰家兔的淋巴细胞转换率和血清抗体水平,表明灭活苗中添加适量的酵母葡聚糖能提高疫苗的免疫效力,增强新西兰家兔的免疫功能。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 文献综述
• 第一章 酵母葡聚糖的研究进展
• 1.1 酵母细胞壁的结构
• 1.2 酵母葡聚糖的提取
• 1.2.1 酸法提取
• 1.2.2 碱法提取
• 1.2.3 酶-碱法
• 1.2.4 其它方法
• 1.3 水溶性酵母葡聚糖的研究进展
• 1.3.1 物理修饰法
• 1.3.2 生物修饰法
• 1.3.3 化学修饰法
• 1.4 酵母葡聚糖的主要生物学功能
• 1.4.1 增强免疫功能
• 1.4.2 增强生物体抗病毒、细菌、真菌以及寄生虫感染的能力
• 1.5 酵母葡聚糖的应用
• 1.5.1 酵母葡聚糖在家畜方面的应用
• 1.5.2 酵母葡聚糖在家禽方面的应用
• 1.5.3 酵母葡聚糖在水产方面的应用
• 1.6 展望
• 试验研究
• 第二章 水溶性酵母葡聚糖的制备及其含量的测定
• 2.1 材料
• 2.1.1 供试药物
• 2.1.2 仪器
• 2.1.3 试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 水溶性酵母葡聚糖的制备
• 2.2.2 水溶性酵母葡聚糖的鉴定
• 2.2.3 溶液的配制
• 2.2.4 测定条件的确立
• 2.2.5 标准曲线的建立
• 2.2.6 换算因子的测定
• 2.2.7 水溶性酵母葡聚糖含量的测定
• 2.2.8 处理样品稳定性试验
• 2.2.9 精密度试验
• 2.2.10 回收率试验
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 水溶性酵母葡聚糖的鉴定
• 2.3.2 测定条件的确立
• 2.3.3 标准曲线的确立
• 2.3.4 换算因子的测定
• 2.3.5 水溶性酵母葡聚糖含量的测定
• 2.3.6 处理样品的稳定性
• 2.3.7 精密度试验
• 2.3.8 试验样品的回收率
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第三章 水溶性酵母葡聚糖的安全性试验
• 3.1 材料
• 3.1.1 药物
• 3.1.2 试验动物
• 3.2 方法
• 3.2.1 水溶性酵母葡聚糖的配制
• 3.2.2 热原检测试验分组和设计
• 3.2.3 肌肉刺激性试验分组和设计
• 3.2.4 急性毒性试验分组和设计
• 3.3 结果
• 3.3.1 水溶性酵母葡聚糖的热原检测结果
• 3.3.2 水溶性酵母葡聚糖的肌肉刺激性试验结果
• 3.3.3 水溶性酵母葡聚糖的急性毒性试验结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 第四章 水溶性酵母葡聚糖的体外抑菌试验和体内抗感染试验
• 4.1 材料
• 4.1.1 药物
• 4.1.2 供试菌株及培养基
• 4.1.3 试验动物
• 4.1.4 水溶性酵母葡聚糖溶液的配制
• 4.1.5 抑菌药敏纸片的制备
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 水溶性酵母葡聚糖的体外抑菌试验
• 4.2.2 水溶性酵母葡聚糖的体内抗感染试验
• 4.3. 结果与分析
• 4.3.1 水溶性酵母葡聚糖的体外抑菌试验结果
• 4.3.2 水溶性酵母葡聚糖的体内抗感染试验
• 4.4 讨论
• 4.5 小结
• 第五章 酵母葡聚糖金黄色葡萄球菌灭活苗的制备和免疫保护试验
• 5.1 材料
• 5.1.1 药物
• 5.1.2 菌株
• 5.1.3 试剂
• 5.1.4 试验动物
• 5.2 方法
• 5.2.1 普通金黄色葡萄球菌油乳剂灭活苗的制备
• 5.2.2 酵母葡聚糖金黄色葡萄球菌灭活苗的制备
• 5.2.3 疫苗安全性检验
• 5.2.4 疫苗免疫保护试验
• 5.3 结果
• 5.3.1 疫苗性状测定
• 5.3.2 疫苗安全性检验结果
• 5.3.3 疫苗免疫保护试验结果
• 5.4. 讨论
• 5.5 小结
• 第六章 酵母葡聚糖对金黄色葡萄球菌灭活苗免疫新西兰家兔效果的影响
• 6.1 材料
• 6.1.1 疫苗
• 6.1.2 试验用血清
• 6.1.3 试剂
• 6.1.4 仪器
• 6.1.5 试验动物
• 6.2 方法
• 6.2.1 试验分组
• 6.2.2 淋巴细胞转化率的测定
• 6.2.3 抗体水平的测定
• 6.2.4 数据处理
• 6.3 结果与分析
• 6.3.1 葡聚糖苗对新西兰家兔淋巴细胞转化率的影响
• 6.3.2 葡聚糖苗对葡萄球菌抗体水平的影响
• 6.4 讨论
• 6.5 小结
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介