食品中磺胺二甲嘧啶残留酶联免疫方法的建立

论文摘要

磺胺二甲基嘧啶（SMZ）是一种广泛用于人类和畜禽生产中常用的抗菌药物,主要用于促进牛,羊,猪,以及家禽的生长。但其对人体有潜在的毒副性作用。为了检测可食用性动物食品（猪肉,鸡肉,鸡蛋,鱼肉,牛奶和肝脏）中磺胺二甲基嘧啶的残留,本文建立了一种直接对其进行测定的竞争酶联免疫方法。本文制备了针对磺胺二甲基嘧啶的特异性抗体,建立了完整的针对磺胺二甲基嘧啶残留的简单快速的酶联免疫分析方法,其灵敏度达到0.5μgkg-1。磺胺二甲基嘧啶在不同基质中的最低检测限比较低,在肝脏中是5μgkg-1,在其它基质中是2μgkg-1,均远远低于规定的最高残留限量值,符合国际标准检测要求。样品经过甲醇提取,并用缓冲液稀释一定倍数后可以直接用该方法进行检测。检测猪肉,鸡肉,鱼肉,鸡蛋和牛奶可以通过稀释20倍消除基质影响,猪肝稀释50倍可以消除基质影响。通过检测回收率70%-120%,证明了在食品中检测磺胺二甲基嘧啶残留的简单,有效,快速的方法的准确性。采用两种不同方法合成了两种酶标抗原,用来比较同源酶标和异源酶标对ELISA检测结果的灵敏度和特异性的影响。结果表明,用异源酶标可以得到更高的灵敏度。μgkg-1针对磺胺二甲基嘧啶特异性抗体的特异性,对14种磺胺药物进行了检测。SMZ抗体显示出较好的特异性,除与磺胺二甲基嘧啶的结构相差一个甲基的磺胺甲基嘧啶有13.3%的交叉反应外,其余13种均低于0.5%。针对磺胺二甲基嘧啶兽药残留的传统检测方法是高效液相色谱法（HPLC）,以建立的磺胺二甲基嘧啶高效液相色谱检测方法为标准,对建立的磺胺二甲基嘧啶直接竞争ELISA检测方法的准确性进行验证。HPLC检测结果与ELISA检测结果比较显示出了良好的相关性,线性相关系数大于0.9。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1.前言
• 1.1 兽药及其对食品安全的影响
• 1.1.1 兽药和兽药残留
• 1.1.2 兽药残留与食品安全
• 1.2 磺胺类药物概述
• 1.2.1 磺胺类药物的性质和作用
• 1.3 动物源性食品中磺胺的残留及其检测
• 1.3.1 动物源性食品中出现磺胺残留的原因
• 1.3.2 现有检测分析方法方法概述
• 1.3.3 高效液相色谱（HPLC）法概述
• 1.4 酶联免疫检测技术研究进展
• 1.4.1 基本原理
• 1.4.2 技术环节
• 1.4.3 ELISA方法的选择
• 1.5 本文研究对象及其主要内容
• 1.5.1 磺胺二甲基嘧啶简介
• 1.5.2 磺胺二甲基嘧啶常用检测方法
• 1.5.3 本文研究内容
• 2.材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 试剂与药品
• 2.1.2 实验仪器与材料
• 2.1.3 待测样品
• 2.1.4 实验动物
• 2.1.5 常用酶及其底物
• 2.1.6 常用溶液的配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 人工抗原和包被抗原的合成
• 2.2.2 酶标抗原的制备
• 2.2.3 样品前处理
• 2.2.4 抗体的制备与纯化
• 2.2.5 抗血清效价的测定
• 2.2.6 直接竞争酶联免疫法建立磺胺二甲基嘧啶标准曲线
• 2.2.7 标液稀释剂的优化
• 2.2.8 特异性实验
• 2.2.9 酶标抗原稳定性实验
• 2.2.10 直接竞争ELISA检测方法性能指标的评价
• 2.2.11 高效液相色谱分析方法
• 3.结果与讨论
• 3.1 磺胺二甲基嘧啶半抗原的设计与合成
• 3.1.1 产物的验证
• 3.1.2 产物的分离提纯
• 3.2 人工免疫原的制备
• 3.3 抗体制备
• 3.3.1 抗血清效价与结合力的变化
• 3.3.2 抗体的纯化
• 3.4 实验条件的优化
• 3.4.1 同源酶标抗原浓度的优化
• 3.4.2 异源酶标抗原浓度优化
• 3.4.3 同源及异源酶标直接竞争反应
• 3.4.4 两种酶标抗原对检测结果的影响
• 3.4.5 抗体特异性
• 3.4.6 ELISA试剂工作浓度的优化
• 3.4.7 标液稀释剂优化实验
• 3.5 标准曲线的建立
• 3.6 酶标稳定性试验
• 3.7 样品基质影响及消除
• 3.8 磺胺二甲基嘧啶直接竞争ELISA检测方法性能指标的评价
• 3.8.1 检测限
• 3.8.2 精密度
• 3.8.3 准确度
• 3.9 磺胺二甲基嘧啶高效液相色谱检测方法
• 3.9.1 高效液相色谱检测磺胺二甲基嘧啶
• 3.9.2 建立高效液相色谱检测磺胺二甲基嘧啶在食品中的残留
• 3.9.3 磺胺二甲基嘧啶直接竞争ELISA检测结果与仪器分析结果的一致性
• 4. 结论
• 5. 展望
• 6. 参考文献
• 7. 研究生期间发表论文情况
• 8. 致谢