麦冬多糖的酶法水解及其产物的分离制备

论文摘要

本论文对麦冬粗多糖进行分离纯化,得到多糖组分OPF-1,在分析麦冬多糖OPF-1单糖组成的基础上,对其一级结构进行了初步研究,并利用生物酶法水解麦冬多糖OPF-1,对其水解产物的成分进行相关分析。采用水提醇沉法得到麦冬粗多糖,Sevage法除蛋白后经葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱分离纯化得到麦冬多糖OPF-1。经薄层层析、凝胶柱层析及紫外光谱扫描鉴定,OPF-1为均一的多糖组分。运用完全酸水解和HPLC法对麦冬多糖OPF-1的单糖组成进行分析,确定了OPF-1的单糖组成主要是果糖和葡萄糖。由标准曲线可得在进样量为20μL的酸解液中,果糖浓度为1.671 mg/mL、葡萄糖浓度为0.116 mg/mL。由此确定了麦冬多糖OPF-1中果糖与葡萄糖之间的摩尔比为16：1。通过高碘酸氧化、Smith降解、GC、R等方法对OPF-1的化学结构进行了研究。结果表明,麦冬多糖OPF-1为果聚糖,其相对分子质量约为48 kDa,主要由2→1或2→6糖苷键连接的呋喃型果糖组成。该多糖中含有的少量葡萄糖,可能连接在多糖的还原性末端。使用Absidia sp.O8s菌产酶水解麦冬多糖OPF-1,产物经Sephadex G-100和SephadexG-50柱分离,得到OP-1、OP-2、OP-3三种麦冬多糖组分,经凝胶过滤法测定,其相对分子质量分别约为32 kDa、9 kDa、1 kDa。通过HPLC法对酶解产物进行进一步成分分析,确定了OP-1、OP-2、OP-3三种组分的单糖组成分别为果糖、果糖、葡萄糖和果糖。结果表明,Absidia sp.O8s菌产酶能部分水解麦冬多糖,使相对分子质量较大的麦冬多糖降解,得到了相对分子质量小于1万的多糖组分。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 麦冬研究概况
• 1.1.1 麦冬的资源情况
• 1.1.2 麦冬的分类
• 1.1.3 麦冬的化学成分
• 1.1.4 麦冬的药理作用
• 1.2 多糖研究概况
• 1.2.1 多糖的来源
• 1.2.2 多糖研究的意义
• 1.3 多糖的研究方法
• 1.3.1 多糖的提取
• 1.3.2 脱蛋白质
• 1.3.3 多糖纯化的方法
• 1.3.4 多糖的纯度鉴定
• 1.4 多糖的结构分析
• 1.4.1 化学分析方法
• 1.4.2 物理方法
• 1.4.3 多糖相对分子质量的测定
• 1.5 酶法水解麦冬多糖的研究概况
• 1.6 本论文主要研究内容
• 第二章 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 菌种
• 2.1.2 试剂与仪器
• 2.1.2.1 试剂
• 2.1.2.2 仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 麦冬多糖的提取
• 2.2.2 麦冬粗多糖的分离纯化
• 2.2.2.1 Sevage法除蛋白
• 2.2.2.2 葡聚糖凝胶柱层析纯化法
• 2.2.2.3 OPF-1的纯度鉴定
• 2.2.3 麦冬多糖OPF-1的单糖组分分析
• 2.2.3.1 全水解
• 2.2.3.2 OPF-1的单糖组成定性分析
• 2.2.3.3 OPF-1的单糖组成定量分析
• 2.2.4 高碘酸氧化和Smith降解
• 2.2.4.1 高碘酸氧化
• 2.2.4.2 Smith降解
• 2.2.5 OPF-1红外光谱分析
• 2.2.6 麦冬多糖OPF-1的酶法水解
• 2.2.6.1 培养基
• 2.2.6.2 麦冬浸出液的制备及菌种的发酵
• 2.2.6.3 粗酶液的制备
• 2.2.6.4 麦冬多糖OPF-1与生物酶反应
• 2.2.7 麦冬多糖OPF-1酶解产物的分析
• 2.2.7.1 OPF-1酶解产物的分离
• 2.2.7.2 OPF-1酶解产物中各组分单糖组成的分析
• 2.2.8 凝胶过滤法测定OPF-1及其酶解产物的相对分子质量
• 2.2.8.1 麦冬多糖OPF-1相对分子质量测定
• 2.2.8.2 酶解产物中各组分相对分子质量的测定
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 麦冬多糖OPF-1纯化结果分析
• 3.1.1 Sephadex G-100柱纯化麦冬多糖
• 3.1.2 OPF-1的纯度鉴定
• 3.2 OPF-1单糖组分分析结果
• 3.2.1 标准混合单糖HPLC图谱分析
• 3.2.2 OPF-1单糖组分定性分析
• 3.2.3 OPF-1单糖组分定量分析
• 3.3 高碘酸氧化
• 3.3.1 高碘酸钠消耗量标准曲线
• 3.3.2 高碘酸氧化结果分析
• 3.4 Smith降解
• 3.4.1 标准品GC图谱分析
• 3.4.2 Smith降解产物分析
• 3.5 OPF-1的红外光谱分析
• 3.6 麦冬多糖OPF-1酶解产物的研究
• 3.6.1 OPF-1酶解产物的分离
• 3.6.2 酶解产物的单糖组成分析
• 3.7 麦冬多糖OPF-1及其酶解产物的相对分子质量的测定
• 3.7.1 OPF-1相对分子质量的测定
• 3.7.2 OP-1、OP-2、OP-3相对分子质量的测定
• 3.7.3 相对分子质量结果分析
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢