论文摘要
种子是人类粮食的重要来源,有些植物的种子还是重要的工业原料,与人类的生产生活密不可分。因此,通过遗传学和分子学手段提高种子产量具有重要的现实意义。种子大小是影响产量的主要因素之一,以拟南芥作为模式植物,研究调控种子大小的分子机理和寻找控制种子大小的基因,不仅具有重要的理论价值,而且还可将其应用于实践,对提高种子产量起着至关重要的作用。拟南芥功能获得突变体shb1-D的种子明显较野生型的大,功能缺失突变体shb1-L的种子稍微比野生型的小。本实验通过对这两种突变体在控制种子大小方面的研究,初步得出了如下结果和结论:1. shb1-D突变体胚的细胞面积和细胞数目增加对成熟胚细胞大小及细胞数目的分析结果显示,与Wassilewskij(aWs)野生型相比,shb1-D突变体胚的细胞面积和细胞数目都增加;shb1-L缺失突变体胚的细胞面积与细胞数目与Columbia(Col)野生型相比,略有变小。2. shb1-D突变体种子的发育时期延迟对授粉后同一时间突变体与野生型种子的发育时期进行了对比分析,研究发现shb1-D突变体胚的发育较Ws野生型延迟;shb1-L突变体胚的发育时期与Col野生型基本一致。3. SHB1基因在多种器官中表达GUS报告基因在SHB1启动子驱动下的表达结果显示,在拟南芥的花、成熟花粉粒、花粉管、小苗及未授粉胚珠中具有GUS信号积累,证明SHB1基因在拟南芥植株的多种器官中表达。mRNA原位杂交结果显示该基因在不同发育时期的胚和胚乳中表达,表明SHB1基因在种子发育过程中可能起重要的调控作用。4. shb1-D突变体胚乳的细胞化延迟对授粉后5天以及胚发育处于相同时期的shb1-D突变体和Ws野生型种子进行组织切片分析,结果表明这两种条件下,野生型种子的胚乳已经开始细胞化,而突变体种子的胚乳依然没有细胞化,推测可能是突变体胚乳细胞化的延迟导致了种子体积的变大。以上结果表明SHB1基因参与了对拟南芥种子大小的控制。在shb1-D功能获得突变体中,SHB1基因过量表达,使得种子变大。该研究发现了一个对种子大小有正调控作用的基因,为深入研究种子大小决定的机理提供了重要资料。
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中文摘要英文摘要1 引言1.1 被子植物种子的发育1.1.1 被子植物胚的发育1.1.2 被子植物胚乳的发育1.1.3 被子植物种皮的发育1.2 影响种子发育的因素1.2.1 影响胚发育的因素1.2.2 影响胚乳发育的因素1.2.3 无融合生殖与种子发育1.2.4 基因组印迹与种子发育1.3 控制种子大小的遗传机制1.3.1 IKU 途径对种子大小的控制1.3.2 TTG2 途径对种子大小的控制1.3.3 IKU 途径和TTG2 途径互作控制种子的大小1.3.4 AP2 途径对种子大小的控制1.3.5 控制种子大小的模型1.4 细胞数目和细胞大小决定种子的大小1.5 SHB1 基因1.5.1 SHB1 基因的克隆1.5.2 SHB1 基因的定位与已知功能1.6 本研究的目的与意义2 材料与方法2.1 实验材料2.1.1 植物材料2.1.2 菌株与质粒2.1.3 酶及生化试剂2.1.4 PCR引物2.2 实验方法2.2.1 植物基因组DNA 的提取2.2.2 植物组织总RNA 的提取及检测2.2.3 反转录cDNA 第一链的合成2.2.4 PCR 扩增2.2.5 连接反应2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化2.2.7 碱法小量质粒DNA 的提取2.2.8 质粒DNA 的酶切鉴定2.2.9 DNA 序列测定2.2.10 目的片段的回收2.2.11 根癌农杆菌GV3101 感受态细胞的制备与转化2.2.12 pSHB1::GUS 表达载体的构建2.2.13 拟南芥的栽培、转化及分析2.2.14 微分干涉差显微照相分析2.2.15 原位杂交2.2.16 GUS 染色分析2.2.17 花粉粒体外萌发实验2.2.18 半薄切片的制作3 结果与分析3.1 shb1-D 与shb1-L 突变体种子的表型分析3.2 突变体成熟胚细胞大小与细胞数目的分析3.2.1 shb1-D 成熟胚细胞大小与细胞数目的分析3.2.2 shb1-L 成熟胚细胞大小与细胞数目的分析3.3 突变体种子发育进程的分析3.3.1 shb1-D 突变体种子的发育时期延迟3.3.2 shb1-L 突变体种子发育时期与野生型基本一致3.4 SHB1 基因在不同器官中的表达分析3.5 SHB1 基因在种子中的时空表达分析3.6 shb1-D 突变体胚乳的细胞化延迟3.6.1 授粉后shb1-D 突变体胚乳的细胞化延迟3.6.2 胚发育shb1-D 突变体胚乳的细胞化延迟4 讨论4.1 SHB1基因促进细胞的分裂与扩张4.2 shb1-L突变体表型不明显可能与存在同源基因有关4.3 SHB1基因过量表达使种子的发育时间延长4.4 SHB1基因在拟南芥植株的多种器官中表达4.5 胚乳细胞化延迟使shb1-D突变体种子变大4.6 SHB1基因通过IKU途径参与对种子大小的调控5 结论参考文献附录攻读学位期间发表论文情况致谢
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标签:拟南芥论文; 功能获得突变体论文; 功能缺失突变体论文; 种子大小论文; 胚乳细胞化论文;