凝血酶抑制剂阿加曲班对实验性大鼠脑出血灶周组织作用的研究

论文摘要

目的探讨静脉应用凝血酶抑制剂阿加曲班对实验性大鼠ICH后灶周组织的影响,以及探讨凝血酶对大鼠实验性ICH灶周组织的可能损伤机制。方法采用立体定向技术将自体动脉血注入大鼠尾状核区制备大鼠大脑内出血模型。将雄性SD大鼠随机分为三组:假手术组、对照组及阿加曲班组。假手术组:仅立体定向下向右尾状核区插针而不注射动脉血,同时由尾静脉每日一次注射生理盐水(1mg/k曲;对照组:向脑内右侧尾状核区注射60μl自体血,同时由尾静脉每日一次注射生理盐水（1mg/kg）;阿加曲班用药组:向脑内右侧尾状核区注射60μl自体血同时由尾静脉每日一次阿加曲班注射（1mg/kg）。采用免疫组化、RT-PCR及蛋白印迹法分别于1d、3d和5d时间点联合检测灶周脑组织中AQP4、MMP-9及NF-κB表达情况;同时评价应用阿加曲班在ICH后6h、12h、1d、3d、5d、7d时间点时大鼠神经行为缺损评分、血脑屏障通透性和脑水含量等变化情况。结果（1）阿加曲班组各时间点神经功能评分均高于对照组各时间点的评分,在第7d时接近正常评分;在第12h、1d及3d时,阿加曲班组与对照组神经功能评分具有明显差异;而在大鼠ICH后第6h、5d及7d时,对照组及阿加曲班组之间神经功能评分无明显差异。（2）对照组较假手术组脑水含量明显升高（p＜0.01）;对照组脑含水量从6h即开始增加,3d达到高峰,之后缓慢下降,7d仍高于正常;阿加曲班组各时间点脑水含量较对照组各时间点脑水含量明显减少（p＜0.05）。（3）大鼠ICH后各时间点脑组织EB含量增加,出血后6h开始升高,第3d最高,5～7d逐渐降低;阿加曲班组各时间点EB含量明显低于对照组（p＜0.05）。（4）阿加曲班组AQP4阳性细胞表达自12h后各时间点均较同一时间点对照组减少（P＜0.05）;AQP4 mRNA和蛋白表达在对照组三个时间点均升高,第3d达高峰值（p＜0.05）;阿加曲班组在第1d始AQP4 mRNA表达减少,而AQP4蛋白在第3d才显著减少,共同持续到第5d。（5）对照组灶周组织MMP-9阳性细胞普遍表达,阿加曲班组MMP-9阳性细胞表达各时间点均较同一时间点对照组减少（p＜0.05）,MMP-9mRNA和蛋白表达在对照组三个时间点均升高,第3d达高峰值（p＜0.05）;阿加曲班组在第1d（0.56±0.03）始MMP-9 mRNA表达即减少,持续到第5d（0.6±0.03）,而MMP-9蛋白在第3d（0.60±0.04）才显著减少,持续到第5d（0.41±0.05）（p＜0.05）。（6）对照组NF-κB阳性细胞于6h即有明显增多,1d达高峰（p＜0.05）,阿加曲班治疗组NF-κB阳性细胞数少于对照组（p＜0.05）;对照组各时间点ICH的灶周组织NF-κBmRNA和蛋白表达量均高于假手术组（p＜0.05）;阿加曲班组在第1d（1.0±0.05）始NF-κB mRNA表达即减少,持续到第5d（0.64±0.04）;阿加曲班组在第3d（0.59±0.049）NF-κB蛋白印迹表达量减少,持续到第5d（0.50±0.05）（p＜0.05）。结论（1）阿加曲班可有效减低实验性大鼠ICH后灶周脑水肿、降低BBB通透性,对实验性大鼠ICH后的神经功能恢复有一定程度的促进作用;（2）大鼠ICH后AQP4、MMP-9与NF-κB mRNA和蛋白呈时间依赖性动态上调表达变化,与ICH后脑水肿有密切的关系;（3）阿加曲班可有效抑制ICH后AQP4、NF-κB和MMP-9 mRNA及蛋白的表达作用,可能通过下调AQP4、MMP-9与NF-κB表达来促进脑水肿的清除,这可能是阿加曲班减轻脑出血后脑水肿的机制之一。（4）阿加曲班在ICH中的作用间接说明了凝血酶直接参与了AQP4、MMP-9与NF-κB的调控。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 水通道蛋白AQP4研究进展
• 综述参考文献
• 致谢