人MGC5306基因原核、真核表达载体的构建及亚细胞结构的定位

论文摘要

MGC5306基因作为一个新发现的基因,目前国内外对其研究的相关报道还非常少。有实验证据表明MGC5306参与卵巢癌的发生。MGC5306的功能及其作用机理现在还不完全清楚。我们利用基因重组技术构建了MGC5306的原核表达体系,并成功表达了MGC5306（98-204AA）。我们构建了pDsRed-MGC5306,并将其转染至Hela细胞,观察其亚细胞结构的分布及细胞核内的定位。将DsRed-MGC5306和GFP-SUMO1共转染至Hela细胞,通过激光共聚焦发现两者共定位于细胞核内。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 文献综述
• 第一章 MGC5306 的研究进展
• 1.1 MGC5306 的细胞定位
• 1.2 MGC5306 的基因结构
• 1.3 MGC5306 与其他蛋白的相互作用
• 1.4 MGC5306 的生物学功能
• 1.5 MGC5306 在肿瘤发生中的潜在作用
• 第二章 SUMO 化途径的研究进展
• 2.1 SUMO 家族概述
• 2.2 SUMO 化修饰
• 2.3 去SUMO 化修饰
• 2.4 SUMO 蛋白的功能
• 2.4.1 SUMO 的亚细胞定位
• 2.4.2 SUMO 化调节蛋白的转录活性
• 2.4.3 SUMO 化调节蛋白之间的相互作用
• 2.4.4 拮抗泛素化
• 2.4.5 SUMO 在基因组完整性和染色体中的功能
• 2.5 SUMO 第一类家族的研究进展
• 第二部分 实验部分
• 前言
• 第一章 人MGC5306 蛋白原核表达载体的构建
• 1.1 材料
• 1.2 主要试剂
• 1.2.1 原核表达载体构建方面
• 1.2.2 蛋白表达
• 1.3 仪器
• 1.4 方法
• 1.4.1 引物的设计和MGC5306 片段的扩增
• 1.4.2 凝胶中回收质粒pEGFP-N1-MGC5306 的PCR 产物
• 1.4.3 酶切质粒pEGFP-N1-MGC5306 的PCR 回收产物
• 1.4.4 酶切载体质粒pET-41a（+）
• 1.4.5 溶液中回收酶切产物
• 1.4.7 Inoue 法制备超级感受态细胞（DH5α）
• 1.4.8 转化
• 1.4.9 抽提重组质粒Pet-41a（+）-MGC5306
• 1.4.10 重组质粒pET-41a（+）-MGC5306 酶切鉴定
• 1.4.11 目的基因的原核表达
• 1.4.12 菌体总蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 1.5 结果与分析
• 1.5.1 pET-41a（+）-MGC5306 原核表达载体的构建与鉴定
• 1.5.2 IPTG 诱导重组质粒pET-41a（+）-MGC5306 的表达
• 1.6 pET-41a（+）-MGC5306（98-204AA）表达载体的构建
• 1.6.1 方法
• 1.6.2 pET-41a（+）-MGC5306（98-204AA）的构建及鉴定
• 1.6.3 IPTG 诱导重组质粒 pET-41a（+）-MGC5306（98-204AA）
• 1.7 讨论
• 1.7.1 关于 MGC5306 基因的 PCR 扩增和载体选择方面
• 1.7.2 目的蛋白诱导表达
• 1.8 小结
• 第二章 人MGC5306 蛋白真核表达载体的构建及亚细胞结构定位
• 2.1 材料
• 2.2 主要试剂及仪器
• 2.2.1 真核表达载体构建方面
• 2.2.2 亚细胞结构定位方面
• 2.3 方法
• 2.3.1 真核表达载体pDsRED-C1-MGC5306 的构建
• 2.3.2 Hela 细胞的传代培养
• 2.3.3 Hela 细胞的脂质体瞬时转染
• 2.3.4 MGC5306 蛋白的亚细胞结构定位
• 2.3.5 MGC5306 蛋白和蛋白相互作用
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 真核表达载体pDsRed-C1-MGC5306 构建示意图
• 2.4.2 真核表达载体pDsRED-C1-MGC5306 的构建及鉴定
• 2.4.3 MGC5306 蛋白在Hela 细胞中的亚细胞结构定位
• 2.4.4 MGC5306 蛋白和SUMO-1 蛋白相互作用
• 2.5 讨论
• 2.6 小结
• 第三章 结果
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 作者简介