论文摘要
文蛤（Meretrix meretrix Linnaeus）是江苏重要的经济贝类，而文蛤的暴发性死亡严重阻碍该产业的可持续性发展。我们在先前的病理学及流行病学研究发现，大规模死亡的文蛤体内存在一种类病毒粒子，该论文对此病毒粒子的基础生物学进行研究，探索此病毒与文蛤大规模死亡之间的联系。运用透射电镜对异常死亡文蛤的细胞病理变化及感染的病毒粒子进行了超微结构观察。超微结构观察结果显示，患病个体的鳃、消化盲囊、消化道和外套膜中均大量存在一种病毒颗粒，该病毒粒子呈球形，无囊膜，直径45～55nm，核心与核衣壳间无明显界限，未发现病毒包涵体。切片结果显示，该病毒存在于细胞间质及被破坏的上皮及结缔组织的细胞质中。通过差速离心、酒石酸钾垫超速离心与氯化铯密度梯度离心结合等方法对病毒粒子分离纯化。比较了蔗糖、酒石酸钾-甘油与氯化铯三种介质密度梯度离心的方法，得出氯化铯密度梯度离心适合该病毒粒子的提纯。经称量法得到该病毒粒子在氯化铯中的浮密度为1.554～1.582g／ml。病毒粒子经纯化后负染结果显示，该病毒粒子呈球形，二十面体对称，无囊膜，直径在60～75nm，表面结构粗糙，壳粒结构比较明显。同时运用原子力扫描电子显微镜（AFM）对提纯病毒粒子进行观察，发现该病毒粒子的壳粒结构比较明显，具有典型的病毒二十面体对称结构。将提纯病毒粒子进行（RT）-PCR检测，利用已报道的水生双RNA病毒通用引物，以病毒核酸（RNA）的cDNA为模板进行扩增。结果发现，其中一对通用引物编号为PrBl：5’-gCCgACATCgTCAACTCCAC-3’，PrB2：5’-gACAggATCATCTTggCATA-3’可以扩增出文献所报道的大小为524bp的目的条带。初步分析认为，该病毒应初步定位于水生双RNA病毒。另外，通过差速离心与超微过滤相结合的方法得到纯净的病毒液，设计该病毒人工感染试验。试验分设五组，分别为（1）病毒低浓度浸浴；（2）病毒高浓度浸浴；（3）病毒注射；（4）灭活病毒注射；（5）空白对照组（未做任何处理）。试验结果表明，该病毒可以复制出文蛤大规模死亡的特征，而且伴有极高的死亡率。初步分析认为，该病毒与文蛤大规模死亡有密切的联系。