加味青蒿鳖甲汤对ANLL-CR患者BMNC来源DC诱导作用研究

论文摘要

目的意义急性白血病是严重威胁患者生命的恶性血液病,随着现代化疗方法的发展、新的化疗药物的开发以及造血干细胞移植的发展,其缓解率有了很大的提高,有的病例已治愈,但是许多患者仍不免复发而危及生命。白血病复发的根本原因是缓解后患者体内仍存在微量白血病细胞,而机体不能对残留白血病细胞进行免疫监视而清除之。提高患者生存时间甚至治愈白血病,缓解期的治疗显得尤为重要,残留白血病细胞的清除成为重点,这也是目前研究的重点和热点之一。然而,目前尚缺乏缓解后白血病即微小残留白血病（Minimal Residu-al Disease in Leukemia,MRD-L）的有效治疗方法,从中医角度探讨其治疗方法无疑有着重要意义。方法用加味青蒿鳖甲汤灌胃动物（大白兔）制备中药含药血清备用。将达到完全缓解标准的急性白血病患者骨髓经抗凝后,应用绵羊红细胞玫瑰花结程序从骨髓中分离出去T细胞的骨髓单个核细胞（TD-BMNC）,以加味青蒿鳖甲汤含药血清与细胞因子联合培养,观察含药血清对ANLL-CR患者TD-BMNC来源的树突状细胞分化成熟情况的影响。用此法诱导分化的树突状细胞与纯化的正常人或缓解期患者外周血T细胞共同培养,观察对T细胞增殖能力的影响。用激发的T细胞与K562细胞共同培育,以MTT法测定该T细胞对K562细胞的杀伤活性。结果1.DC的形态倒置显微镜下:培养第4d可见细胞成簇生长,由圆形变为不规则形。培养第7d,长出小刺状结构,细胞质变丰富,并长出树突样伪足,培养第9天树突样结构更加明显,细胞质更加丰富。2.DC的抗原表达实验结果表明在这三种培养体系中,ANLL-CR患者去T细胞的骨髓MNC（TD-BMNC）均能分化为形态特征典型的DC,能表达成熟DC的特异性标记（CD-86和CD-1a）,高表达HLA-DR。大、中、小剂量加味青蒿鳖甲汤合细胞因子组的CD-1a表达与细胞因子组比较有显著差异;大剂量加味青蒿鳖甲汤合细胞因子组、大剂量加味青蒿鳖甲汤组的CD-86表达与细胞因子组比较有显著差异;大剂量加味青蒿鳖甲汤合细胞因子组的HLA-DR与大剂量加味青蒿鳖甲汤组、细胞因子组比较有显著差异;3.DC激活T细胞对K562细胞的杀伤率效靶比10:1时,大剂量加味青蒿鳖甲汤合细胞因子组（患者T细胞组）、大剂量加味青蒿鳖甲汤组（患者T细胞组）与细胞因子组（患者T细胞组）比较有显著差异;大剂量加味青蒿鳖甲汤合细胞因子组（正常人T细胞组）与大剂量加味青蒿鳖甲汤组（正常人T细胞组）、细胞因子组（正常人T细胞组）比较有显著差异;效靶比20:1时,大剂量加味青蒿鳖甲汤合细胞因子组（患者T细胞组）、中剂量加味青蒿鳖甲汤合细胞因子组（患者T细胞组）与细胞因子组（患者T细胞组）比较有显著差异;中剂量加味青蒿鳖甲汤合细胞因子组（患者T细胞组）与中剂量加味青蒿鳖甲汤组（患者T细胞组）比较有显著差异;效靶比40:1时,中剂量加味青蒿鳖甲汤合细胞因子组（患者T细胞组）与细胞因子组（患者T细胞组）比较,有显著差异。含药血清组内大中小剂量组之间比较无显著差异。各效靶比时,加味青蒿鳖甲汤合细胞因子组（正常人T细胞组）与加味青蒿鳖甲汤合细胞因子组（患者T细胞组）比较无显著差异,加味青蒿鳖甲汤组（正常人T细胞组）与加味青蒿鳖甲汤组（患者T细胞组）比较无显著差异。同组不同效靶比之间无显著差异。结论在DC的诱导过程中,细胞体积逐渐增大、聚集成集落,显示细胞的增殖,同时细胞胞体出现明显的树突状突起,细胞形态不规则,胞质丰富,并有成簇现象,显示出DC的形态学特征。DC的免疫分子检测显示,在实验的三种培养体系中, ANLL-CR患者去T细胞的骨髓MNC（TD-BMNC）均能分化为形态特征典型的DC,能表达成熟DC的特异性标记（CD-86和CD-1a）,高表达HLA-DR。加味青蒿鳖甲汤含药血清有助于ANLL-CR患者TD-BMNC来源DC的诱导。加味青蒿鳖甲汤含药血清联合细胞因子、单纯的加味青蒿鳖甲汤含药血清、单纯细胞因子诱导的DC激活的T细胞对K562细胞均有杀伤作用,以加味青蒿鳖甲汤含药血清联合细胞因子组为优。其机理可能是含药血清联合细胞因子在诱导DC的过程中对DC分化成熟过程及其功能产生有利的影响,其表型和功能的异常得到修复而趋于正常,从而增强对T细胞的激活效应,但还有待今后的试验进一步证实和论证。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 前言
• 正文
• 文献研究部分
• 一、现代医学对 DC 的认识
• 二、现代医学对微小残留白血病的认识
• 三、微小残留白血病与 DC 的关系
• 四、中医学对微小残留白血病的认识
• 实验研究部分
• 一、材料和方法
• 二、结果
• 分析讨论
• 结论
• 创新点
• 参考文献
• 附录 英文缩略词对照表
• 综述
• 致谢
• 个人简历