新型免疫调节剂NCPP生物效应及其机制研究

论文摘要

肿瘤免疫治疗的方法有非特异性免疫治疗和特异性免疫治疗。过去，人们在肿瘤免疫研究中过于强调特异性抗原和特异性免疫系统，而近年的研究表明，非特异性免疫系统的重要性开始得到了认同。现在，人们认识到，与不能对自身组织产生良好免疫应答的特异性免疫系统形成鲜明对照的是，非特异性免疫系统具有很强的能力来消除单个畸变的自身细胞。这意味着非特异性免疫系统具有在单个细胞水平消除可能发展成为肿瘤细胞的早期遗传变异的潜能。通常，在非特异性免疫系统中，细胞的某些该正常表达的表面结构的缺失可能导致这些细胞被有效清除。所以，人们应该密切关注非特异性免疫在肿瘤免疫中的重要作用。 短棒状杆菌（corynebacterium parvum，CP）制剂（CPP）是一种非特异性免疫增强剂，它是用从健康人骨髓中分离的一种厌氧革兰氏阳性杆菌经甲醛灭活制成的死菌苗。CPP促进机体免疫反应和抗肿瘤疗效已被许多实验及临床研究所证实，尤其在消退癌性胸水方面具有独特疗效。CPP抗肿瘤作用主要是通过对单核巨噬细胞系统强大而持久的刺激，引起巨噬细胞（Mφ）增生、活化、吞噬功能增强、诱导分泌肿瘤坏死因子（TNF-α）、干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL-2）、活性氧（H2O2、NO）等癌细胞杀伤因子及增强NK细胞杀伤活性，达到抑制和杀伤肿瘤细胞及病原微生物的目的，且可通过促进造血多能干细胞分化为单核巨噬细胞，进一步调动机体免疫系统蕴藏抗癌、杀菌潜力。免疫学的进展加深了人们对免疫系统抗肿瘤功能及免疫治疗作用重要性的认识。目前，CPP可以说是激活Mφ活性最好的制剂之一，但副作用较大限制了其临床应用。若能利用现代高科技

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 第一部分 NCPP抗肿瘤作用及机理研究
• 前言
• 材料与方法
• 1.材料与试剂
• 2.主要仪器与设备
• 3.方法
• 3.1 脾激活及抑瘤试验
• 3.2 小鼠腹腔Mφ免疫活性测定
• 3.2.1 腹腔Mφ吞噬功能测定
• 3.2.2 腹腔Mφ的培养
• 2O₂含量测定'>3.2.3 腹腔Mφ产生H₂O₂含量测定
• 3.2.4 腹腔Mφ产生NO含量测定
• 3.2.5 NK细胞杀伤活性测定
• 3.2.6 T细胞增殖活性的测定
• 3.2.7 统计学处理
• 结果
• 1.NCPP与CPP对小鼠脾脏的激活作用
• 2.NCPP与CPP对小鼠艾氏腹水瘤的抑瘤作用
• 3.NCPP与CPP对小鼠腹腔Mφ吞噬功能的影响
• 2O₂和NO的影响'>4.NCPP与CPP对小鼠腹腔Mφ产生H₂O₂和NO的影响
• 5.NCPP与CPP对小鼠脾脏NK细胞杀伤活性的影响
• 6.NCPP与CPP对小鼠脾脏T细胞增殖活性的影响
• 讨论
• 小结
• 附表（图）
• 参考文献
• 附件NCPP制备及质量检验
• 硫乙醇酸盐培养基（不含琼脂）的制备
• NCPP的制备
• NCPP质量检测方法
• 鲎试剂（Tachypleus Amebocyte Lysate ES-Test）法热原测定
• 无菌检查法
• 细菌浓度测定
• 固体含量测定（105℃干烤法）
• 蛋白含量测定法（Lowry法）
• 多糖含量测定（葸酮法）
• 核酸含量测定
• pH值测定法
• 脾激活试验
• 抑瘤试验（艾氏腹水癌）
• 第二部分 NCPP抗结核作用及机理研究
• 前言
• 材料与方法
• 1.材料与试剂
• 2.主要仪器与设备
• 3.方法
• 3.1 攻击菌的制备
• 3.2 对照模型及感染模型的制备（攻击）
• 3.3 试验分组及给药方法
• 3.4 脾菌分离数测定
• 3.5 小鼠腹腔Mφ免疫活性测定
• 3.5.1 腹腔Mφ吞噬功能测定
• 3.5.2 腹腔Mφ的培养
• 2O₂含量测定'>3.5.3 腹腔Mφ产生H₂O₂含量测定
• 3.5.4 腹腔Mφ产生NO含量测定
• 3.5.5 T细胞增殖活性的测定
• 3.5.6 统计学处理
• 结果
• 1.NCPP对豚鼠脾活菌分离数的影响
• 2.病理结果
• 3.NCPP对小鼠腹腔Mφ吞噬功能的影响
• 2O₂和NO的影响'>4.NCPP对小鼠腹腔Mφ产生H₂O₂和NO的影响
• 5.NCPP对小鼠脾脏T细胞增殖活性的影响
• 讨论
• 小结
• 附表（图）
• 参考文献
• 第三部分 NCPP抗逆转录病毒作用的研究
• 前言
• 材料与方法
• 1.材料与试剂
• 2.主要仪器与设备
• 3.方法
• 3.1 建立动物模型
• 3.2 病毒毒力测定
• 3.3 剂量、分组与给药
• 3.4 观察、测定
• 结果
• 1.病毒毒力测定
• 2.给药14天时指标变化
• 2.1 体重及血液学指标
• 2.2 存活率
• 讨论
• 小结
• 附表（图）
• 参考文献
• 第四部分 NCPP抗肝纤维化作用及机理研究
• 前言
• 材料与方法
• 1.材料与试剂
• 2.主要仪器与设备
• 3.方法
• 3.1 猴肝病理学检查
• 3.2 大鼠免疫损伤性肝纤维化动物模型的建立
• 3.3 NCPP给药
• 3.4 病理学检测及肝纤维化的分级
• 3.5 血清学检测
• 3.6 统计学分析
• 3.7 NCPP对巨噬细胞分泌细胞因子的影响
• 3.7.1 腹腔巨噬细胞培养
• 3.7.2 细胞因子的检测
• 结果
• 1.猴肝病理检查结果
• 2.大鼠肝脏病理学检查结果
• 3.肝功能的测定结果
• 4.血清学指标的测定结果
• 5.血清IFN-γ、TNF-α、TGF-β的测定结果
• 6.细胞因子IFN-γ的检测结果
• 7.细胞因子TNF-α的检测结果
• 讨论
• 小结
• 附表（图）
• 参考文献
• 第五部分 NCPP一般药理研究及安全性评价试验总结
• 1.一般药理研究的试验资料
• 1.1 试验目的
• 1.2 结果
• 1.3 结论
• 2.安全性评价
• 2.1 单次给药毒性试验
• 2.1.1 试验目的
• 2.1.2 结果
• 2.1.3 结论
• 2.2 局部用药刺激性试验
• 2.2.1 试验目的
• 2.2.2 结果
• 2.2.3 结论
• 2.3 免疫毒性和/或免疫原性试验
• 2.4 重复给药毒性试验
• 2.4.1 病理组织学检查
• 2.4.2 停药2周恢复期结束时病理检查
• 2.4.3 被留动物NCPP再次给药攻击后处死病理检查
• 2.4.4 结论
• 附图
• 致谢
• 博士在读期间发表论文及论著目录
• 学位论文评阅及答辩情况表