口蹄疫病毒RT-PCR检测与分型方法的建立及在新疆的应用

论文摘要

口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）是偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病，传染力极强性，一旦发生，常呈流行性，病情急，传播快，蔓延广。由于其传染性质，疾病暴发经常导致严重地经济损失，而且，对家畜方面的国内和国际贸易产生相当大的冲击。由于口蹄疫的特殊性质，寻求快速、准确的检测及分型方法，对于疾病的控制与研究具有重要意义。1 RT-PCR检测口蹄疫病毒根据已经发表的口蹄疫病毒（FMDV）全基因序列，设计了一对引物，建立RT-PCR方法，检测口蹄疫病毒。引物位置在4011-4030与4413-4432左右。在O、A、AsiaⅠ三个血清型之间基本一致。试验结果表明该方法就有良好的特异性和敏感性。用上述方法同时扩增FMDV以及PRRSV、RV、VSV、TGEV、PEDV六种病毒RNA模板，结果仅FMDV可以得到明显的条带，其他5种对照病毒未见明显杂条带，PCR产物酶切得到了预期大小的条带。方法可以检测到100.67TCID50的病毒量。病料检测结果与国家参考实验室检测结果一致，表明方法可以用来检测FMDV。2多重RT-PCR对口蹄疫病毒分型根据已经发表的口蹄疫病毒（FMDV）全基因序列，设计了一套引物，建立多重RT-PCR方法，区分A型、AsiaⅠ型、O型三种血清型的病毒。方法对O型病毒的敏感性为101.00LD50，对AsiaⅠ型的敏感性为101.25LD50，对A型病毒敏感性为101.00LD50。而且具有良好的特异性，PCR产物测序表明得到了正确的扩增产物。方法能够区分保存适当的病料，结果与国家参考实验室检测结果一致，表明方法可以用于病毒的分型。3新疆样品FMDV持续性感染调查FMDV可以在动物体内建立持续性感染。动物不表现临床症状，但病毒存在于体内。本实验利用两种RT-PCR检测方法对采自新疆的样品进行检测，方法一为兰州兽医研究所检测方法，方法二为论文第一章中的RT-PCR检测方法。采集新疆14地州奶牛场牛O／P液1043份，屠宰羊淋巴结347份，共1390份。检测结果为1390份样品全是阴性。结果表明采自新疆的样品不存在FMDV持续性感染。

论文目录

• 前言
• 摘要
• ABSTRACT
• 第一篇 文献综述:口蹄疫病毒的研究展
• 1 病原学
• 2 流行病学
• 3 FMDV基因组结构和功能
• 4 遗传与变异
• 5 口蹄疫疫苗的研究进展
• 6 FMD诊断技术的研究进展
• 7 持续性感染及成因初探
• 参考文献
• 第二篇 研究报告
• 第一章 RT-PCR检测口蹄疫病毒
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 参考文献
• 5 英文摘要
• 第二章 多重RT-PCR对口蹄疫病毒分型
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 参考文献
• 5 英文摘要
• 第三章 新疆样品FMDV持续性感染调查
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 参考文献
• 5 英文摘要
• 全文总结
• 附录:常用试剂的配制
• 致谢