海南省番木瓜根结线虫病病原的鉴定及其检测方法的研究

海南省番木瓜根结线虫病病原的鉴定及其检测方法的研究

论文摘要

根结线虫(Meloidogyne spp.)为植物根系内寄生物,可对农作物造成严重的危害。在中国目前已报道的根结线虫有效种为39种,而西班牙根结线虫(Meloidogyne hispanica Hirschmann,1986)近期已于海南省被首次发现。为了评估该线虫的潜在经济危害性,以及提供控制其传播扩散的有效实用手段,对源自海南省的西班牙根结线虫群体的同工酶、寄主范围、mtDNA及rDNA位点的特征和IGS2-RFLP检测方法进行了研究。对2个代表性西班牙根结线虫群体在7种常见经济作物11个品种上的繁殖力进行了测试。结果显示番茄为西班牙根结线虫的高度适宜寄主,西瓜、大豆为低度适宜寄主,辣椒、花生、棉花为非寄主。寄主范围的测试结果表明西班牙根结线虫是一种具有潜在危害性的农作物病原物。对西班牙根结线虫与其它常见根结线虫在mtDNA和rDNA位点的核酸序列的异同进行了比较分析。西班牙根结线虫的mtDNA的COII-lrRNA基因间隔区的扩增产物约1.8 kb,与南方根结线虫(M.incognita)和爪哇根结线虫(M.javanica)的扩增产物大小相同;西班牙根结线虫的rDNA的ITS区和IGS2区的扩增产物分别约760和710bp,与4个常见种的扩增产物大小相似。rDNA-ITS序列比较分析揭示,西班牙根结线虫与南方、爪哇、花生和北方根结线虫的ITS序列的同源性分别为99.69%,99.38%,99.85%和82.03%。rDNA-IGS2序列比较分析显示,西班牙根结线虫与南方、爪哇、花生和北方根结线虫的IGS2序列同源性分别为93.31%,93.75%,94.32%和57.01%。研制了西班牙根结线虫的快速分子检测方法。该方法利用选择限制性内切酶TaqI对IGS2区的PCR扩增产物进行酶切,获得了西班牙根结线虫的554bp的特异性条带。通过对4种常见根结线虫单条线虫的测试,验证了其可靠性。本方法具有快速、灵敏的特点,可用于西班牙根结线虫单条线虫的直接鉴定。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 上篇 文献综述
  • 第一章 根结线虫的分布、危害和防治
  • 1 根结线虫的分布
  • 2 根结线虫的危害
  • 3 根结线虫病抗病育种及抗线虫基因工程
  • 4 根结线虫病的防治
  • 第二章 根结线虫的种类鉴定和检测方法
  • 1 根结线虫的传统鉴定和检测方法
  • (1) 形态学方法
  • (2) 鉴别寄主实验
  • (3) 同工酶表型分析
  • 2 根结线虫的分子生物学鉴定和检测方法
  • (1) 基因组DNA—RFLP分析方法
  • (2) DNA探针
  • (3) rDNA—PCR—RFLP方法
  • (4) mtDNA-PCR-RFLP方法
  • (5) RAPD和SCAR方法
  • 下篇 研究内容
  • 第一章 西班牙根结线虫群体的形态和同工酶鉴定及其寄主范围的测试
  • 1 材料与方法
  • 1.1 线虫群体
  • 1.2 线虫的杀死、固定和测计
  • 1.3 雌虫会阴花纹形态的观察
  • 1.4 同工酶分析
  • 1.5 寄主范围测试
  • 2 结果
  • 2.1 形态鉴定
  • 2.2 同工酶鉴定
  • 2.3 寄主范围测试
  • 3 讨论
  • 第二章 西班牙根结线虫与其它常见根结线虫在mtDNA和rDNA位点的比较分析
  • 1 材料与方法
  • 1.1 供试线虫群体
  • 1.2 DNA准备
  • 1.3 mtDNA-PCR
  • 1.4 rDNA的ITS和IGS2区域PCR扩增
  • 2 结果
  • 2.1 mtDNA扩增片段比较分析
  • 2.2 rDNA-ITS扩增片段和同源性比较分析
  • 2.3 rDNA-IGS2扩增片段和同源性比较分析
  • 3 讨论
  • 第三章 西班牙根结线虫IGS2-RFLP分子检测方法的研究
  • 1 材料与方法
  • 1.1 供试线虫群体
  • 1.2 DNA准备
  • 1.3 IGS2-RFLP分子检测方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 全文结论
  • 附录
  • 致谢
  • 相关论文文献

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